Caracterização de funcional da ubiquitina ligase SCF1 (FBXO25)

• Processo: 10/13045-4
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2013
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Marcelo Damário Gomes
• Beneficiário: Marcelo Damário Gomes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Núcleo celular Ligases Proteínas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Corpos Nucleares | E3 ligases | Fbxo25 | núcleo | Proteína-Proteína | proteólise intracelular | Núcleo

Resumo

A FBXO25 é uma proteína F-box identificada pela primeira vez em análises in silico por Cenciarelli e colaboradores, em 1999. A proteína codificada pelo gene FBXO25 apresenta 65% de identidade com Atrogin-1, no entanto nenhum estudo tinha sido dedicado a este gene até o inicio desse estudo em nosso laboratório em 2004. No nosso primeiro projeto FAPESP, caracterizamos celular e molecularmente esta proteína, descrevendo sua distribuição tecidual e localização subcelular, e sua capacidade de formar um complexo SCF1 ativo. Mostramos também que, embora possua uma alta similaridade com a Atrogin-1, estas não parecem apresentar sobreposição de função, uma vez que a expressão de Atrogin1 é fortemente induzida na atrofia muscular, enquanto que a expressão de FBXO25 não é alterada. Depois com projeto financiado pela FAPESP mostramos que a FBXO25 aparecia concentrada no núcleo numa nova estrutura que denominamos como FAND. Isolamos pelo sistema duplo-híbrido em leveduras e por um novo método bioquímico de copurificação (GF-TAP) por nós desenvolvido 132 proteínas associada a FBXO25. Caracterizamos funcionalmente uma dessas parceiras, a beta-actina, como um regulador da distribuição da FBXO25 nos FANDs.Neste projeto vamos aplicar metodologias bioquímicas (microarranjos de proteína e TAP) para identificar, substratos desse complexo SCF1 contendo a FBXO25, SCF1(FBXO25), que serão posteriormente confirmados através de experimentos funcionais em células geneticamente engenheiradas para expressar a FBXO25 (selvagem e mutante inativa). Pretendemos assim, avançar nos estudos para elucidação do papel biológico desta proteína. (AU)