Utilização de proteínas dissulfeto isomerase como ferramentas para renaturação in vitro e in vivo de proteínas expressas em Escherichia coli

• Processo: 03/11174-8
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Programa Primeiros Projetos
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2004
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2005
• Área do conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Acordo de Cooperação: CNPq - Programa Primeiros Projetos
• Pesquisador responsável: Inácio de Loiola Meirelles Junqueira de Azevedo
• Beneficiário: Inácio de Loiola Meirelles Junqueira de Azevedo
• Instituição Sede: Instituto Butantan. Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado à bolsa: 03/01191-2 - Utilizacao de proteinas dissulfeto isomerase como ferramentas para renaturacao in vitro e in vivo de proteinas expressas em escherichia coli, BP.PD
• Assunto(s): Biotecnologia Proteínas recombinantes Toxinas Bothrops Escherichia coli Dissulfetos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biotecnologia | Pontes Dissulfeto | Proteinas Recombinantes | Toxinas De Serpentes

Resumo

As proteínas dissulfeto isomerase (PDIs) são responsáveis pela montagem e isomenzação de pontes disulfeto nas células eucariontes e bacterianas. Durante a geração e caracterização de ESTs da glândula de veneno de B. insularis, identificamos cDNAs altamente expressos codificando PDIs. Diversos estudos mostraram a viabilidade de sua utilização como ferramenta biotecnológica para promover o refolding de proteínas recombinantes em E. coli. Neste projeto, visamos a caracterização completa dos cDNAs de PDIs encontradas e desenvolver sistemas que permitam o refolding e montagem de pontes dissulfeto de proteínas modelo, especialmente de toxinas, através das propriedades catalítias da PDI da própria serpente. Estes sistemas serão de dois tipos: um, baseado no uso in vitro da PDI como refoldase de proteínas recombinantes; o outro, na coexpressão da PDI com proteínas modelo no citoplasma de E. coli para refolding in vivo. Tais sistemas poderão resultar em ferramentas que aumentem a eficiência na produção heteróloga bacteriana de proteínas e toxinas dependentes de pontes dissulfeto. (AU)