Caracterização das concentrações de hormônio anti-Mülleriano (AMH) em cadelas e lobas cinza (Canis lupus baileyi)

• Processo: 17/06047-0
• Modalidade de apoio: Auxílio à Pesquisa - Regular
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2017
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2019
• Área do conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Maria Denise Lopes
• Beneficiário: Maria Denise Lopes
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Botucatu. Botucatu , SP, Brasil
• Pesquisadores associados: Andressa Dalmazzo
• Assunto(s): Hormônio antimülleriano Técnicas in vitro Fisiologia da reprodução Criopreservação Ovário Lobos Cães
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anti-mulleriano | Cadela | Criopreservação | in vitro | Ovário | Fisiologia da Reprodução

Resumo

O objetivo é caracterizar as concentrações de hormônio anti-mülleriano (AMH) em lobas cinza (Canis lupus baileyi) (experimento 1) e em cadelas domésticas (experimento 2) e utilizar os níveis séricos de AMH de cadelas como ferramenta de escolha das doadoras de ovário a serem criopreservados, como modelo experimental para lobas, bem como avaliar a produção de AMH in vitro em amostras de córtex ovariano de cadelas, a fresco e após a descongelação (experimento 3). Experimento 1: Determinação dos níveis hormonais séricos de hormônio anti-muleriano em lobas cinza. Serão utilizadas 7 fêmeas de lobo cinza comum. As lobas terão seu sangue uma durante a sua estação reprodutiva (inverno) e outra durante o anestro (verão) durante dois anos consecutivos. Será realizado um questionário para registro do histórico reprodutivo com intuito de correlacionar estas informações com as concentrações de AMH. Experimento 2: Determinação dos níveis hormonais séricos de hormônio anti-muleriano em cadelas. Serão coletadas amostras de sangue de 90 cadelas divididas em 6 grupos experimentais: pré-púberes (G1, n=15), cadelas jovens (1º e 2º cio) (G2, n=15), adultas (G3, n=15), gestantes (G4, n=15), idosas (acima de 8 anos) (G5, n=15) e castradas (G6, n=15). Para os grupos G3 e G4, serão realizadas coletas de sangue em cada uma das fases do ciclo estral (proestro, estro, diestro e anestro) com o objetivo de avaliar possíveis flutuações das concentrações de AMH durante o ciclo. Todas as amostras serão centrifugadas e o soro armazenado a -20ºC até a realização das análises. Dosagens de AMH sérico serão realizadas através de ELISA (AnshLab, Texas, EUA). Experimento 3: Produção de AMH em cultura in vitro de ovários frescos e após descongelação de cadelas. Vinte cadelas serão castradas e uma amostra de sangue será coletada, centrifugada e armazenada a -80ºC, os ovários serão isolados e terão seu córtex fatiado, um fragmento será destinado ao cultivo in vitro, outro será processado para análise histológica e outros dois fragmentos serão vitrificados para posterior cultivo in vitro e análise histológica. Para o aquecimento, as amostras serão imersas imediatamente em uma placa Petri contendo solução de descongelação e depois imersas em solução de sucrose a 0,5M (SS). Para cultivo in vitro as amostras frescas e descongeladas serão fatiadas em pedaços menores e serão transferidas para placas de 96 poços contendo 200 µL de solução de crescimento folicular (GM). As placas serão mantidas a 5% CO2 a 38,5°C, a cada dois dias 100 µL de meio serão removidos e armazenados em criotubos a -20ºC para dosagens de AMH. O mesmo volume de meio fresco será adicionado aos poços. Após 7 dias de cultura in vitro, as amostras serão removidas e processadas para análise histológica. As dosagens de estrógeno e progesterona das amostras provenientes do cultivo in vitro serão realizadas utilizando kits comerciais para técnica de radioimunoensaio, e as dosagens de AMH do meio e das amostras de soro serão realizadas através de ELISA (AnshLab, Texas, EUA) no laboratório de endocrinologia do Zoológico de Saint Louis. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ACKERMANN, C. L.; KOZLOWSKI, C. P.; CALLAHAN, M.; BAUMAN, K.; CLAWITTER, H.; ASA, C. S.; LOPES, M. D.. Anti-Mullerian hormone concentration in female gray wolf (Canis lupus) - preliminary results. REPRODUCTION IN DOMESTIC ANIMALS, v. 54, p. 2-pg., 2019-06-01. (17/06047-0)