Identificação de marcadores moleculares em câncer de mama através da técnica de microarray utilizando uma plataforma de exons tumor-associados

• Processo: 06/02875-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado Direto
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Dirce Maria Carraro
• Beneficiário: Maria Cristina Rodrigues Rangel
• Instituição Sede: Instituto Ludwig de Pesquisa sobre o Câncer (ILPC). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Neoplasias mamárias Processamento alternativo RNA mensageiro Reação em cadeia da polimerase em tempo real
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cancer De Mama | Microarray | Rt-Pcr Em Tempo Real | Splicing Alternativo | Oncologia/ Biologia Molecular

Resumo

Dentre todas as mortes por câncer na população feminina brasileira, o câncer de mama tem a maior taxa de incidência. Embora alguns marcadores moleculares estejam sendo utilizados rotineiramente para o prognóstico desta doença, a busca por marcadores adicionais que possam contribuir para o aumento da sobrevida global e tratamentos mais efetivos é necessária. Análises recentes têm mostrado a ocorrência de splicing alternativo (AS) do mRNA em pelo menos 70% dos genes humanos, contribuindo para a ampla diversidade de transcritos e para o aumento da complexidade proteômica. Sabe-se que algumas variantes geradas por AS são preferencialmente expressas em tumores humanos. Sendo assim, a importância do AS em câncer reside na possibilidade de correlacionar variantes específicas com informações clínicas com o objetivo de identificar potenciais marcadores moleculares. Na primeira etapa deste projeto, para identificar variantes de splicing associadas a câncer de mama, foram selecionados através de uma análise computacional 270 exons expressos em vários tecidos tumorais, dos quais 75 foram associados a câncer de mama, por apresentarem expressão apenas em bibliotecas originadas de tecido tumoral de mama. Esses exons foram imobilizados em uma membrana de nylon e hibridizados com linhagens e amostras tumorais e normais de mama. Foi aplicado o teste T Student para determinar os exons diferencialmente expressos (p<0,05) em várias comparações. As análises resultaram em 14 exons superexpressos em tumor de mama. A anotação funcional foi realizada, e alguns deles, tais como BAP1, LIP8, MBTPS1, PRKD2, TRIM 37 e PPP1R8 parecem estar relacionados ao câncer, por serem genes envolvidos em proliferação celular e desenvolvimento. Esses exons selecionados devem imprescindivelmente passar por uma validação para verificar se a superexpressão se deve exclusivamente à variante que contém o exon e não ao gene como um todo. Assim, para continuidade deste projeto, propõe-se a validação experimental dos 14 candidatos previamente selecionados na primeira etapa do projeto através da técnica de RT-PCR em tempo real. Essa validação deverá ser realizada no grupo de amostras já utilizadas no estudo, e os exons que forem confirmados como variantes superexpressas em tumor de mama, serão analisados em um grupo de amostras independentes e correlacionados com características clínicas e anatomopatológicas, com a finalidade de testar seu potencial de marcador molecular. (AU)