Construção de bactérias recombinantes produtoras de violaceína: possível aplicação no desenvolvimento de novos protocolos de purificação e no desenvolvimento de novos agentes antitumorais

• Processo: 06/58826-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2007
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Marcelo Brocchi
• Beneficiário: Dorival Martins Junior
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Purificação Salmonella enterica Escherichia coli Violaceína
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anti-Tumoral | Escherichia Coli | Expressao | Purificacao | Salmonella Enterica | Violaceina

Resumo

Salmonella enterica Typhimurium é uma linhagem bacteriana anaeróbica facultativa que apresenta uma propriedade interessante de colonizar regiões do microambiente de tumores sólidos de maneira bastante específica; desta forma, tal bactéria torna-se um potencial transportador de agentes químioterápicos especificamente para células tumorais. Nosso trabalho visa a construção de uma linhagem de S. Typhimurium atenuada capaz de produzir um pigmento de ação antitumoral comprovada, a violaceína. Para tal, o operon contendo as enzimas da via biossintética da violaceína será amplificado por PCR e subclonado no vetor pET-3a em E. coli. Posteriormente, o operon será subclonado nos vetores pΥA3137trc pΥA3074trc (alto e baixo número de cópia, respectivarfíente) e inserido na linhagem atenuada c3987 de S. Typhimurium. A produção de violaceína será averiguada pela extração seguida de purificação da amostra e análises de ressonância magnética nuclear e posterior comparação com a produção de Chromobacterium violaceum. O trabalho visa ainda usar a violaceína obtida para um ensaio piloto de citotoxicidade e indução de apoptose em cultura de células tumorais pelos ensaios de redução do MTT, atividade fosfatásica e marcação com anexinaV-FITC. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

MARTINS, D.; COSTA, F. T. M.; BROCCHI, M.; DURAN, N.. Evaluation of the antibacterial activity of poly-(D,L-lactide-co-glycolide) nanoparticles containing violacein. JOURNAL OF NANOPARTICLE RESEARCH, v. 13, n. 1, p. 355-363, JAN 2011. (06/58826-8)

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MARTINS JUNIOR, Dorival. Atividade antimicrobiana da violaceina pura ou em nanoformulação. 2009. Dissertação de Mestrado - Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Instituto de Biologia Campinas, SP.