Caracterização da atividade da agarase de Burkholderia sp.

• Processo: 09/03772-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2009
• Data de Término da vigência: 28 de fevereiro de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Eliana Gertrudes de Macedo Lemos
• Beneficiário: Thaís Carvalho Maester Casanova
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Assunto(s): Tributirina Esterases Patentes Lipase
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: esterase | lipase | Patentes | Sítios catalíticos | Tributirina | Prospecção de enzimas de interesse biotecnológico em bibliotecas metagenômicas

Resumo

As enzimas lipolíticas possuem enorme potencial biotecnológico, seja para formulação de detergentes, na indústria de couro, na produção de cosméticos, fármacos, aromas, biodiesel, dentre outros. A maior parte das lipases é de origem microbiana, apresenta baixa toxicidade e é facilmente biodegradável. O objetivo deste trabalho foi o de prospectar genes para a codificação de enzimas lipolíticas em uma biblioteca metagenômica fosmidial de um consórcio microbiano degradador de hidrocarbonetos de petróleo, com 4224 clones. A seleção foi feita pela atividade lipolítica através do cultivo dos clones em meio de cultura Luria-Bertani (LB) suplementado com 1% de tributirina (v/v), 1% de goma arábica (p/v), 0,00125% de cloranfenicol (v/v) e 0,001% de arabinose (v/v). As células permaneceram a 37 ºC por 72 horas e depois foram transferidas a 4 ºC. A avaliação foi realizada pela observação da formação de halo ao redor das colônias, sendo positiva para 30 clones, dentre os quais dois foram selecionados e tiveram o DNA sub-clonado em vetor pUC19. Os DNAs das sub-bibliotecas foram sequenciados, gerando um contig completo para o clone PL28.F10, que foi comparado com as sequências do banco National Center for Biotechnology Information (NCBI), através do programa ORF Finder. Uma ORF codificadora de esterase/lipase de 303 aminoácidos e 61% de identidade com micro-organismo não cultivável foi encontrada. Foram feitos alinhamentos com o programa Clustal W e construção de árvores filogenéticas pelo programa MEGA 4, para comparação entre a ORF encontrada, ORF15, e as sequências depositadas. As árvores indicam que o clone apresenta a ORF15 mais próxima da família IV das esterases/lipases, pois de localizou em um ramo único, diferenciando-se dos outros representantes desta família. Através dos alinhamentos foi possível identificar os sítios ativos representativos da família, confirmando o resultado das árvores filogenéticas, no entanto, foram verificadas algumas modificações nos resíduos de aminoácidos. Quando a mesma análise foi realizada com sequências já patenteadas, a ORF15 se localizou em um ramo único, sendo um grupo irmão das sequências de esterases/lipases da BASF (Patente WO0100842), relacionada à biossíntese de FK228 e seus análogos, utilizados no tratamento do câncer e de uma proteína não identificada da CAMBIA (Patente 6562958, número de acesso AAQ29806.1)., utilizada para diagnóstico e terapia, que possui o domínio conservado das esterases/lipases

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

CASANOVA, Thaís Carvalho Maester. Prospecção de sequências genômicas codificadoras de enzimas lipolíticas degradadoras de hidrocarbonetos de petróleo.. 2011. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Ciências Biomédicas (ICB/SDI) São Paulo.