Padronização da metodologia de cultura de células da granulosa antrais humanas, com padrão esteroidogênico característico da fase folicular do ciclo menstrual, como suporte para a maturação in vitro (MIV) em procedimentos de Reprodução Assistida

• Processo: 09/04129-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2011
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Saúde Materno-infantil
• Pesquisador responsável: Ana Carolina Japur de Sá Rosa e Silva
• Beneficiário: Carolina Oliveira Campos
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Maturação in vitro Reprodução humana Perfil hormonal Esteroidogênese
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: cultivo de granulosa | esteroidogênese | maturação in vitro | Morfologia celular | perfil hormonal | Reproduçao Humana

Resumo

INTRODUÇAO: Avanços no estabelecimento de condições de cultura adequadas para o crescimento e diferenciação de folículos ovarianos e/ou seus componentes torna possível o estudo de questões básicas acerca do desenvolvimento folicular e situações clínicas específicas, visando o aprimoramento das técnicas de tratamento in vitro em Reprodução Humana. Já existe na literatura um padrão de cultivo de granulosa humana que perpetua a luteinização das células, o que inviabiliza sua utilização para co-cultivo de oócitos imaturos. OBJETIVOS: Este projeto propõe modificar o meio de cultivo já protocolado, com intuito de reverter total ou parcialmente o processo de luteinização e permitir sua utilização no co-cultivo de oócitos. A avaliação desta reversão será feita através da caracterização do padrão de produção hormonal das células no meio de cultivo e da ultra-estrutura celular. MATERIAL E MÉTODOS: As células da granulosa serão obtidas durante o procedimento de captação de oócitos de 10 pacientes submetidas à Reprodução Assistida em um serviço de Reprodução Humana. As células serão extraídas do fluido folicular e semeadas em meio alfa-MEM ou TCM199 na concentração de 30000 células/poço e cultivadas em por 144 horas. O meio de cultivo será trocado a cada 48 horas e o meio removido será estocado em -20ºC para análise posterior, assim os meios serão coletados após 48, 96 e 144 horas de cultivo para dosagem de estradiol e progesterona. A cultura final será analisada em microscopia óptica na placa e após ressuspendidas e fixadas para microscopia eletrônica. Este projeto foi submetido e aprovado pelo comitê de ética em pesquisa.