Estudos espectroscópicos da correlação estrutura-função da enzima Clorocatecol 1,2-Dioxigenase de Pseudomonas putida

• Processo: 10/04568-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2010
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Exatas e da Terra - Física - Física da Matéria Condensada
• Pesquisador responsável: Antonio José da Costa Filho
• Beneficiário: Nathalya Cristina de Moraes Roso Mesquita
• Instituição Sede: Instituto de Física de São Carlos (IFSC). Universidade de São Paulo (USP). São Carlos , SP, Brasil
• Assunto(s): Biofísica Mutagênese sítio-dirigida Dicroísmo circular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: correlação estrutura-função de proteínas | dicroismo circular | dioxigenase | mutação sitio dirigida | Ressonância Magnética Eletrônica | Biofísica Molecular

Resumo

No presente projeto é proposto o estudo da correlação estrutura-função da enzima clorocatecol 1,2-catecol de Pseudomonas putida (Pp 1,2-CCD). A enzima Pp 1,2-CCD é responsável pela clivagem de hidrocarbonetos aromáticos através da incorporação de ambos os átomos de uma molécula de oxigênio à estrutura do anel aromático. Mais especificamente, nos interessa como o mecanismo de ação da referida enzima é controlado por moléculas extrínsecas, como fosfolipídios, e por resíduos do sítio ativo. O interesse pela interação entre a enzima e fosfolipídios surgiu apenas recentemente quando da obtenção da primeira estrutura cristalográfica de uma enzima da mesma família da CCD (família das dioxigenases intradiol). Em tal estrutura foi observado um sítio de ligação por monômero para fosfolipídios, o que fez com que várias questões relativas à influência desses sobre a atividade da enzima fossem levantadas. Além disso, a investigação da dependência do mecanismo de catálise em relação a resíduos no sítio ativo da enzima pode ser feita através de mutações sítio específicas em que um resíduo nativo é trocado e as conseqüentes alterações na atividade e na estrutura são monitoradas. Nosso objetivo é fazer uso das técnicas de Ressonância Magnética Eletrônica (RPE), Dicroísmo Circular (CD) e calorimetria para estudar alterações conformacionais da enzima induzidas tanto por moléculas de fosfolipídios quanto pela troca de resíduos do sítio ativo, assim obtendo informações que correlacionem as mudanças estruturais com o mecanismo de atividade enzimática.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

MESQUITA, Nathalya Cristina de Moraes Roso. Estudos da correlação estrutura-função da enzima Clorocatecol 1,2-Dioxigenase de Pseudomonas putida. 2012. Dissertação de Mestrado - Universidade de São Paulo (USP). Instituto de Física de São Carlos (IFSC/BT) São Carlos.