Avaliação da viabilidade do sêmen canino congelado em vapor de nitrogênio líquido ou pelo método automatizado

• Processo: 11/00281-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2012
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Fabiana Ferreira de Souza
• Beneficiário: Natália Regina Souza Bravo
• Instituição Sede: Reitoria. Universidade de Franca (UNIFRAN). Franca , SP, Brasil
• Assunto(s): Cães Espermatozoides Congelamento
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biofrezer | cão | congelação | Espermatozóide | Biotecnologia do sêmen

Resumo

O objetivo deste trabalho será estudar a qualidade e viabilidade do sêmen congelado pelo sistema automatizado (TK 3000®, TK Equipamentos para Reprodução, Uberaba, MG). Serão utilizados 6 cães adultos para a colheita de sêmen através da manipulação digital do pênis. Após a colheita, o sêmen será avaliado quanto à motilidade, vigor, concentração, morfologia espermática, integridade e funcionalidade da membrana, atividade citoquímica mitocondrial, capacitação e reação do acrossoma e fragmentação do DNA. Então o sêmen será diluído em meio à base de TRIS-GEMA-GLICOSE, envasado em palhetas francesas de 0,5 mL, numa concentração de 100x106 espermatozóides móveis/mL, na temperatura ambiente. Metade das palhetas será congelada pelo método tradicional e a outra metade pelo sistema automatizado. No método tradicional as palhetas serão refrigeradas a 5ºC na caixa Botutainer® (Biotech, Botucatu, SP), durante 1 h e congeladas sob o vapor de nitrogênio líquido em container de poliestireno, durante 20 minutos. No sistema automatizado, a refrigeração será realizada em uma velocidade de 0,25°C/minuto até 5°C, durante 60 minutos. A congelação será feita no mesmo equipamento, com uma curva de temperatura de -20°C/minuto até atingir-120°C. Ao final do procedimento, as palhetas serão armazenadas em botijão contendo nitrogênio líquido - 196ºC. As palhetas serão descongeladas a 70ºC, durante 8 segundos e analisadas pelos mesmos testes utilizados para avaliação inicial, com exceção da concentração espermática.