Modulação do Transporte em Túbulos Renais por Angiotensina II.

• Processo: 11/01903-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2011
• Data de Término da vigência: 30 de abril de 2011
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Nancy Amaral Reboucas
• Beneficiário: Michele Tatiana Bortolucci
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 09/51044-2 - Modulação do transporte em túbulos renais por angiotensina II, AP.R
• Assunto(s): Angiotensina II Túbulos renais proximais NHE3 Biologia molecular
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: angiotensina II | Atrap | Nhe3 | Túbulo proximal | Biologia Molecular

Resumo

Cultura de células de túbulos proximais: Ratos machos Wistar, com peso entre 180 e 220 g serão anestesiados e sacrificados por sangramento após corte no coração. Os rins serão imediatamente removidos. A cápsula será retirada, córtex será separada de medula. A parte cortical será macerada com lâmina e em seguida será digerida com colagenase e DNase segundo protocolo já definido. As células serão separadas em gradiente de percoll e cultivadas. Marcadores específicos serão utilizados para identificação das células cultivadas. Co-transportador Na-glicose e DPPIV são marcadores adequados para células de túbulos proximais. As células serão cultivadas em meio controle com pH 7,4 e em meio com pH ácido (6,9), na ausência ou na presença de AngII. O tratamento será por 24 horas. Proteínas a serem analisadas nas células de túbulos proximais: NHE3; AT1R; ATRAP e os fatores de transcrição NFAT2, NFAT3, NFAT5. Serão avaliados os níveis de proteína por Western-blot e immuno-blot e de mRNA por RT-PCR.O interesse em desenvolver a cultura primária de células deve-se também à necessidade de aprofundar os estudos do promotor do gene NHE3. Células isoladas facilitam os estudos com a utilização de imunoprecipitação da cromatina, para avaliação de quais os fatores de transcrição são mobilizados para a modulação da transcrição desse gene na acidose metabólica e na estimulação com a angiotensina II.