Caracterização molecular da interação de fatores trans-ativadores de D. melanogaster com elementos cis-reguladores identificados no promotor do gene de pufe de DNA BhC4-1

• Processo: 12/00228-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nadia Monesi
• Beneficiário: Natalia Doretto Chaves
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/50962-8 - Caracterizacao molecular da interacao de fatores trans-ativadores de d. melanogaster com elementos cis-reguladores identificados no promotor do gene de pufe de dna bhc4-1., AP.R
• Assunto(s): Eucariotos Expressão gênica Regulação da expressão gênica Fatores de transcrição Drosophila melanogaster
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: ensaios funcionais | genes de pufes de DNA | promotores de eucariotos | regulação de expressão gênica

Resumo

Nosso laboratório investiga mecanismos que promovem padrões de expressão gênica regulados no desenvolvimento em eucariotos superiores. Dentro deste tema, nosso grupo tem contribuído com a caracterização funcional de módulos cis-reguladores que promovem padrões de expressão gênica regulados no desenvolvimento, bem como com a identificação de fatores trans-ativadores que interagem com estes módulos cis-reguladores. Como modelo de estudo, utilizamos o gene de pufe de DNA BhC4-1, cuja análise funcional está sendo realizada no sistema-modelo D. melanogaster. Em transgênese, este gene é expresso de modo regulado na glândula salivar de prépupas e na glândula anelar a partir do final do desenvolvimento embrionário. Ensaios funcionais revelaram que os elementos cis-reguladores que controlam a expressão do gene na glândula salivar são separáveis daqueles que regulam a expressão na glândula anelar. Resultados de experimentos de interação gênica revelaram que produtos de genes diretamente induzidos por ecdisona modulam os níveis de expressão de BhC4-1 na glândula salivar. Especificamente, foi demonstrado que as isoformas Z3 do gene BR-C e E74A do gene E74 têm papel importante na regulação de BhC4-1 na glândula salivar. Mais recentemente, um rastreamento realizado no sistema mono-híbrido de levedura resultou na identificação de 8 genes candidatos a funcionarem como reguladores da transcrição de BhC4-1 na glândula anelar. Neste contexto, o presente projeto tem dois objetivos principais: a) caracterizar os mecanismos de interação do fator de transcrição E74A com o enhancer de glândula salivar do gene BhC4-1; b) validar experimentalmente a atividade de trans-ativação de 8 genes candidatos a regular a expressão de BhC4-1 na glândula anelar. Para alcançar estes objetivos serão utilizadas metodologias complementares que permitirão caracterizar a atividade de trans-ativação dos fatores identificados tanto in vitro, como in vivo. Os resultados obtidos contribuirão para a caracterização dos mecanismos reguladores da expressão de genes de pufes de DNA e também para o entendimento de mecanismos gerais de regulação de expressão gênica no desenvolvimento.