Análise da Produção de Melatonina Induzida por LPS em Culturas de Neurônios de Diferentes Regiões Encefálicas

• Processo: 12/11909-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2012
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2013
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Fisiologia - Fisiologia de Órgãos e Sistemas
• Pesquisador responsável: Luciana Pinato
• Beneficiário: Isabela Lopes Trevizan
• Instituição Sede: Faculdade de Filosofia e Ciências (FFC). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Marília. Marília , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/51495-4 - Produção de melatonina por células do sistema nervoso central em condições de injúria, AP.JP
• Assunto(s): Fármacos neuroprotetores Neuroproteção Lipopolissacarídeos Neuroinflamação Citocinas Sistema nervoso Melatonina Neurônios
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: citocinas | Lps | melatonina | Neuroinflamação | neurônios | Neuroproteção | sistema nervoso

Resumo

Moléculas que sinalizam injúria tais como citocinas pró-inflamatórias, e padrões moleculares associados à patógenos (PAMPs), podem suprimir a produção de melatonina pela glândula pineal e induzir a síntese desta indolamina por células imunocompetentes. Recentemente demonstramos que após injeção intracerebroventricular de lipopolissacarídeo de bactérias gram-negativas (LPS) ocorre supressão da produção noturna de melatonina pela glândula pineal e produção no cerebelo, o que sugere uma alternância na produção noturna de melatonina entre estas estruturas em situações de injúria encefálica. Agora, pretendemos determinar quais células do Sistema nervoso central produzem melatonina e estabelecer as bases moleculares que promovem a essa produção no SNC. Assim temos como objetivos avaliar a produção de melatonina induzida por TNF ou LPS em culturas enriquecidas, ou exclusivas de neurônios e em seguida determinar a relevância da procedência dos neurônios (córtex, hipocampo e cerebelo) sobre a capacidade destas células produzirem melatonina. Nos primeiros 4 meses de projeto pretendemos desenvolver as culturas de células nervosas e exclusivas de neurônios. Astrócitos serão identificados pela técnica de imunofluorescência utilizando-se o anticorpo anti-GFAP, microglia será identificada por anticorpos OX-42 e ED1 e neurônios serão identificados por anticorpo anti-NeuN seguindo protocolo de imunoistoquímica. Em seguida realizaremos o tratamento das culturas de neurônios desafiados com TNF ou LPS. Serão avaliadas a expressão das enzimas AANAT e HIOMT nas células por imunofluorescência e o conteúdo de melatonina do meio de cultura por ELISA.