Proteínas quinases e regulação do metabolismo de glicogênio em Neurospora crassa. Identificação e caracterização funcional e bioquímica

• Processo: 12/08652-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2012
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Maria Celia Bertolini
• Beneficiário: Thiago de Souza Candido
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Espectrometria de massas Proteínas recombinantes Fungos filamentosos Fosfoproteoma Fosforilação Proteínas quinases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Espectrometria de massas | Fosfoproteoma | fosforilação | Fungo filamentoso | proteína recombinante | Proteínas quinases | Bioquímica e Biologia Molecular de Microrganismos

Resumo

Este projeto está inserido em um projeto maior do laboratório e tem como objetivo principal caracterizar proteínas quinases identificadas previamente como reguladoras do metabolismo de glicogênio e também identificar proteínas quinases que fosforilam a enzima glicogênio sintase do fungo Neurospora crassa. No trabalho de Mestrado do aluno candidato à bolsa, foi realizada uma investigação sobre proteínas quinases envolvidas com a regulação do metabolismo do glicogênio utilizando uma coleção de linhagens mutantes em genes codificadores de proteínas quinases. Várias proteínas foram identificadas, sendo algumas funcionalmente caracterizadas em outros organismos e a grande maioria proteínas sem função biológica ainda conhecida. Foi verificado que algumas linhagens mutantes apresentaram alteração na fosforilação da enzima glicogênio sintase do fungo (GSN), demonstrado tanto através da quantificação da atividade enzimática quanto pela presença de diferentes isoformas fosforiladas, através de géis bidimensionais seguidos de Western blot. Com o objetivo de aprofundar o conhecimento acerca das proteínas quinases regulando metabolismo de glicogênio no fungo, este projeto propõe a realização dos seguintes estudos: 1- investigar, de uma maneira global, quais proteínas quinases fosforilam GSN através de MudPIT, 2- investigar, mais detalhadamente, o papel da proteína quinase NcPho85-like (uma quinase dependente de ciclina e identificada no rastreamento) e de sua provável ciclina parceira na fosforilação da GSN e 3- investigar os prováveis alvos de fosforilação das proteínas MAP quinases codificadas pelas ORFs NCU06419 e NCU02234 (identificadas no rastreamento) através de uma análise fosfoproteômica. Os resultados serão importantes para a compreensão da fosforilação como um mecanismo de controle do metabolismo de glicogênio no fungo, seja de uma maneira global, não diretamente sobre as enzimas envolvidas no processo, seja diretamente atuando sobre a glicogênio sintase, a enzima mais regulada por eventos de fosforilação.

Publicações acadêmicas

(Referências obtidas automaticamente das Instituições de Ensino e Pesquisa do Estado de São Paulo)

CANDIDO, Thiago de Souza. PCL-1, uma ciclina multifuncional envolvida na regulação do metabolismo do glicogênio, germinação, divisão celular e na resposta ao estresse por cálcio em Neurospora crassa. 2016. Tese de Doutorado - Universidade Estadual Paulista (Unesp). Instituto de Química. Araraquara Araraquara.