Expressão e purificação das proteínas recombinantes GP60 de Cryptosporidium hominis e COWP6 de Cryptosporidium parvum visando à produção de IgY policlonal em galinhas para utilização em diagnóstico

• Processo: 13/05622-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de maio de 2013
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2016
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
• Pesquisador responsável: Marcelo Vasconcelos Meireles
• Beneficiário: Alex Akira Nakamura
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária (FMVA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 15/14315-9 - Super expressão da proteína COWP6 de Cryptosporidium parvum visando a produção de anticorpo IgG monoclonal em camundongos para utilização em diagnóstico, BE.EP.PD
• Assunto(s): Cryptosporidium parvum Técnicas e procedimentos diagnósticos Imunoglobulinas
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cowp6 | Cryptosporidium hominis | Cryptosporidium parvum | diagnóstico | Gp60 | IgY | Doenças Parasitárias dos Animais

Resumo

Cryptosporidium spp. são protozoários que infectam uma grande variedade de vertebrados. Cryptosporidium parvum possui muitos hospedeiros animais, incluindo o homem e é um importante agente etiológico de diarréia em ruminantes. Já Cryptosporidium hominis é uma espécie adaptada ao hospedeiro humano. Dentre os vários marcadores genéticos que são utilizados para identificação específica de Cryptosporidium, o locus mais comumente utilizado para estudos de epidemiologia molecular é o gene que codifica a glicoproteína GP60, pois contém várias regiões com altas taxas de mutação, está associada à adesão do parasito a célula hospedeira, sendo uma candidata em potencial para o desenvolvimento de novos fármacos, vacinas e de novos métodos de diagnóstico e tratamento para a criptosporidiose. As proteínas da parede dos oocistos de Cryptosporidium (COWP) são um grupo de proteínas localizadas na superfície da parede dos oocistos e tem participação em sua estrutura e na resistência dos oocistos em condições ambientais. As proteínas GP60 e COWP são alvos em potencial para clonagem e expressão heteróloga em E. coli, visando à produção de proteínas recombinantes para utilização no diagnóstico pelo ensaio imunoenzimático (ELISA) e pela reação de imunofluorescência direta (RID), e também para isolamento e purificação de oocistos, por meio de utilização de técnicas imunológicas. Os objetivos desse trabalho são a clonagem, expressão e purificação das proteínas recombinantes GP60 de C. hominis e COWP6 de C. parvum, a imunização de poedeiras comerciais para obtenção de IgY anti-GP60 e IgY anti-COWP6 e o desenvolvimento das técnicas de diagnóstico ELISA de captura, para detecção de antígenos solúveis (GP60) de C. hominis, e a reação de imunofluorescência direta (RID) para detecção de oocistos (proteína COWP6) de C. parvum. (AU)