Monitoramento de pacientes imunodeprimidos com doença de Chagas: níveis de parasitemia e associação com o perfil, polimorfismo de citocinas sobrevida e características dos isolados de Trypanosoma cruzi em transplante de órgãos, uso de drogas imunossupress

• Processo: 13/15122-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2014
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Maria Aparecida Shikanai Yasuda
• Beneficiário: Caroline Medeji Ricardo dos Santos
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina (FM). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 12/50273-0 - Monitoramento de pacientes imunodeprimidos com Doenças de Chagas: níveis de parasitemia e associação com o perfil, poliformismo de citonas sobrevidas e características dos isolados Trypanosoma cruzi em transplante de órgãos, uso de drogas imunossupressoras e co-infecção com o vírus da imunodeficiência humana, AP.R
• Assunto(s): Parasitemia Trypanosoma cruzi Reação em cadeia por polimerase (PCR)
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Parasitemia | Pcr | Trypanosoma cruzi | Moléstias Infecciosas e Parasitárias

Resumo

Plano de atividades: Avaliação do nível de parasitemia e análise de dadosObjetivo: Apoiar o projeto na área de realização das provas moleculares para análise de parasitemia e tabelamento dos resultados para posterior análise estatísticaJustificativa da opção pela Bolsa de Treinamento Técnico (TTI): A solicitação de uma bolsa de treinamento técnico é fundamental pelo grande número de exames envolvidos, haverá necessidade de apoio para o preparo de meios de cultura e reagentes. O aluno será treinado nas seguintes técnicas: Preparo de reagentes para manutenção de cultura de T. cruzi soluções tampão para armazenagem de amostras e extração de DNA. O aluno receberá treinamento da técnica de extração de DNA e analise de produtos amplificados em gel de agarose. Finalmente o aluno poderá colaborar no preparo dos dados coletados para a análise estatística.Trata-se de projeto complexo no qual várias técnicas moleculares qualitativas e quantitativas deverão ser utilizadas, demandando mão de obra para o estudo de um grande número de amostras. MATERIAL, MÉTODOSPreparo de reagentes: meio LIT para manutenção de cultura de Trypanosoma cruzi, Guanidina HCl - EDTA e tris-EDTA para armazenagem de amostras biológicas., DTAB, CTAB para extração de DNA e TAE e gel de agarose para análise dos produtos amplificadosExtração de DNA de Trypanosoma cruzi: A extração de formas epimastigotas de T. cruzi será realizada segundo Sambrook et al. (1989) com modificações, será utilizada proteinase K na concentração final de 100 mg/mL e dodecilsulfato de sódio (SDS) 1%. Após incubação, o DNA será extraído com fenol-clorofórmio-isoamil (25:24:1), precipitado com álcool absoluto e acetato de sódio 3 M, por fim será lavado com álcool a 70%. O precipitado será ressuspenso em 50 mL de água bidestilada estéril.PCR qualitativo: Será utilizado o par de oligonucleotídeos iniciadores designados S35 e S36 (Degrave et al, 1988), que amplifica um fragmento de 330 pares de base do cinetoplasto, sintetizados pela Gibco Life Tecnologies. A PCR seráfoi realizada segundo Ávila et al (1991) e Gomes et al (1998), com algumas modificações.Análise dos produtos amplificados: Os produtos obtidos após amplificação serão revelados em gel de agarose a 2% ou 3% (TAE 1x), corado com brometo de etídeo e registrados pelo aparelho de fotodocumentação Eagle Eye (Stratagene).Comentários sobre os resultados esperados: Conta-se com o apoio do bolsista para o preparo dos reagentes, purificação de DNA, PCR qualitativo e análise dos produtos amplificados. Além disso, espera-se também colaboração no tabelamento dos resultados obtidos.