Estudo da expressão gênica e protéica da mioglobina e da citoglobina em modelo de ratos com hipotireoidismo subclínico

• Processo: 13/11910-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2014
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Anatomia Patológica e Patologia Clínica
• Pesquisador responsável: Gisele Giannocco
• Beneficiário: Micaela Frasson Montero
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina do ABC (FMABC). Organização Social de Saúde. Fundação do ABC. Santo André , SP, Brasil
• Assunto(s): Endocrinologia Anatomia patológica Expressão gênica Hipotireoidismo Mioglobina Densitometria Reação em cadeia por polimerase (PCR) Western blotting Análise de variância
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: citoglobina | expressões gênica e protéica | Hipotireoidismo subclinico | Mioglobina | Endocrinologia

Resumo

O hipotireoidismo subclínico (HS) está associado ao aumento do risco de doenças cardiovasculares. A mioglobina (Mb) e a citoglobina (Cygb) são proteínas que servem como reservatórios de oxigênio e protegem contra espécies reativas de oxigênio, no músculo cardíaco de ratos com HS. Ainda não se esclareceu sobre os mecanismos que controlam a sua expressão e seus níveis no HS, que podem contribuir no aparecimento de danos celulares e de doenças. Objetivos: Investigar níveis de expressão gênica e protéica de Mb e da Cygb, e avaliar expressão gênica de proteínas de defesa antioxidantes: superóxido dismutase (SOD), catalase (CAT) e glutationa peroxidase (GPX) em ratos com HS.Métodos: Serão usados ratos Wistar machos com 8 semanas de idade, do biotério da FMABC, distribuídos nos seguintes grupos: (a) Controle (C): serão ratos que receberão salina ip e serão submetidos à eutanásia após 20 dias da cirurgia fictícia (n=8); (b) Hipotireoideo (Tx): serão ratos submetidos a tiroidectomia total e tratados com metimazol (0,01%) e que receberão salina ip por 20 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8); (c) Hipertireoideo (Tx+T4): ratos Tx que receberão T4 (dose 0,8 µg/100g, ip) por 5 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8); (d) Hipotireoideo subclínico (HS): serão ratos submetidos a tiroidectomia parcial que receberão salina ip por 15 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8); (e) Hipotireoideo subclínico tratado com tiroxina (HS+T4): serão ratos submetidos a tiroidectomia parcial que receberão T4 (dose 0,8 µg/100g, ip) por 5 dias sendo submetidos à eutanásia após esse período (n=8). Após os períodos determinados, os animais serão anestesiados e o sangue colhido para posterior dosagem de T3, T4 e TSH sérico. A eutanásia será feita por exsanguinaçao e remoção cirúrgica do coração com o animal sob anestesia. O ventrículo será removido, congelado em nitrogênio líquido e armazenado no freezer -80ºC e posteriormente será submetido à avaliação da expressão gênica e protéica da Mb e da Cytb por reação em cadeia de polimerase em tempo real (qPCR) e western blot, respectivamente. Os dados, tanto do Real Time PCR quanto os valores de densitometria dos blots do western blot serão analisados no Excel- Microsoft Office e as amostras a serem estudadas serão normalizadas pelos seus controles correspondentes. Os dados obtidos serão analisados por análise de variância (One way ANOVA) com pós-teste Student Newman Keuls. As diferenças serão consideradas significativas para valores de p<0.05. (AU)