| Processo: | 13/10807-9 |
| Modalidade de apoio: | Bolsas no Brasil - Mestrado |
| Data de Início da vigência: | 01 de novembro de 2013 |
| Data de Término da vigência: | 28 de fevereiro de 2015 |
| Área de conhecimento: | Ciências Agrárias - Recursos Pesqueiros e Engenharia de Pesca - Aquicultura |
| Pesquisador responsável: | Alexandre Ninhaus Silveira |
| Beneficiário: | Douglas de Castro Ribeiro |
| Instituição Sede: | Faculdade de Engenharia (FEIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Ilha Solteira. Ilha Solteira , SP, Brasil |
| Assunto(s): | Biotecnologia Congelamento Criopreservação Oócitos Análise morfológica Prochilodus lineatus |
| Palavra(s)-Chave do Pesquisador: | Análise Morfológica | Aquicultura | biotecnologia | Congelamento | crioconservação | Reprodução de peixes |
Resumo Objetiva-se desenvolver um protocolo para o congelamento de oócitos de Prochilodus lineatus, avaliando o uso de três soluções extensoras (solução de Ringer, solução de Hank e tampão fosfato) e de três substâncias crioprotetoras (Dimetilsulfóxido, Propilenoglicol, e Metanol), associadas a 0,2M de glicose, em crescentes banhos de osmolaridade (0,5M, 1M, 2M e 4M). Os oócitos serão envasados em palhetas de 0,5 ml, e expostos a uma curva de resfriamento de 2°C/min até -12,5ºC (por 5min), 0,3 C/min até -40°C, 10ºC/min até -80°C e 50°C/min até -160ºC, sendo posteriormente imersas em nitrogênio líquido (LN2) e estocadas por 24 horas. As amostras serão descongeladas em "banho-maria" a 27°C por 10s, e reidratados por banhos em soluções de osmolaridade decrescentes de crioprotetores (2M, 1 M, 0,5 M). A posterior integridade das membranas será avaliada pelo uso de corante azul de tripano, e a viabilidade pela fertilização dos oócitos. O experimento contará com amostragens composta por 100 oócitos e 5 repetições cada tratamento, sendo seus dados avaliados quanto à normalidade (Shapiro Wilk) e homogeneidade (Barlett) e as médias comparadas através de uma analise de variância (ANOVA) e Tukey (±=0,05). Morfologicamente, os embriões serão submetidos à microscopia óptica (coradas em PAS, HE e azul de toluidina), microscopia eletrônica de Varredura e microscopia eletrônica de transmissão. | |
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