Criopreservação de oócitos de Prochilodus lineatus (Valenciennes, 1836)

Resumo

Objetiva-se desenvolver um protocolo para o congelamento de oócitos de Prochilodus lineatus, avaliando o uso de três soluções extensoras (solução de Ringer, solução de Hank e tampão fosfato) e de três substâncias crioprotetoras (Dimetilsulfóxido, Propilenoglicol, e Metanol), associadas a 0,2M de glicose, em crescentes banhos de osmolaridade (0,5M, 1M, 2M e 4M). Os oócitos serão envasados em palhetas de 0,5 ml, e expostos a uma curva de resfriamento de 2°C/min até -12,5ºC (por 5min), 0,3 C/min até -40°C, 10ºC/min até -80°C e 50°C/min até -160ºC, sendo posteriormente imersas em nitrogênio líquido (LN2) e estocadas por 24 horas. As amostras serão descongeladas em "banho-maria" a 27°C por 10s, e reidratados por banhos em soluções de osmolaridade decrescentes de crioprotetores (2M, 1 M, 0,5 M). A posterior integridade das membranas será avaliada pelo uso de corante azul de tripano, e a viabilidade pela fertilização dos oócitos. O experimento contará com amostragens composta por 100 oócitos e 5 repetições cada tratamento, sendo seus dados avaliados quanto à normalidade (Shapiro Wilk) e homogeneidade (Barlett) e as médias comparadas através de uma analise de variância (ANOVA) e Tukey (±=0,05). Morfologicamente, os embriões serão submetidos à microscopia óptica (coradas em PAS, HE e azul de toluidina), microscopia eletrônica de Varredura e microscopia eletrônica de transmissão. (AU)