Expressão e caracterização de mutantes de luciferases pH-sensitivas

• Processo: 13/21432-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de novembro de 2013
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biofísica - Radiologia e Fotobiologia
• Pesquisador responsável: Vadim Viviani
• Beneficiário: Aline Fernanda Simões
• Instituição Sede: Centro de Ciências e Tecnologias para a Sustentabilidade (CCTS). Universidade Federal de São Carlos (UFSCAR). Sorocaba , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 11/23961-0 - Luciferases pH-sensitivas: origem estrutural da sensibilidade ao pH, e viabilidade de emprego em biossensores celulares de pH e cátions de metais pesados, AP.R
• Assunto(s): Bioluminescência Luciferases
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: bioluminescência | biossensores | luciferases | Bioluminescencia

Resumo

As luciferases de vaga-lumes e outros besouros catalisam a oxidação de uma luciferina benzotiazólica ativada por ATP produzindo a bioluminescência. As luciferases de besouros podem ser divididas funcionalmente em pH-sensitivas ou pH-insensitivas. A sensibilidade ao pH é encontrada apenas em vaga-lumes e pode estar associada com interações de resíduos protonáveis envolvidos no fechamento e estabilização do sítio-ativo mantendo uma conformação apropriada para a emissão de luz verde. Anteriormente identificamos uma importante rede de interações polares que ajudam a manter o sito-ativo das luciferases fechado e que, possivelmente, estaria envolvida com a sensibilidade ao pH. Buscando compreender quais desses resíduos estão relacionadas com a sensibilidade ao pH, estamos realizando mutagênese sítio-dirigida com a luciferase de Macrolampis sp2, para identificar os resíduos envolvidos com a sensibilidade ao pH. Assim sendo, a candidata planeja expressar e caracterizar as luciferases selvagens e seus mutantes no laboratório para atender projetos na linha do auxílio à pesquisa 2011/23961-0 sobre sensibilidade ao pH. (AU)