Clonagem, expressão e caracterização bioquímica da 3-metilglutaconil-CoA hidratase de Trypanosoma brucei

• Processo: 15/09702-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2015
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2015
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Bioquímica de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Sergio Schenkman
• Beneficiário: Daniela Fernández Curado
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Clonagem Caracterização Enzimas Escherichia coli Trypanosoma brucei brucei Propriedades estruturais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Catabolismo de leucina | clonagem | enzima | Trypanosoma brucei | 3-metilglutaconil coenzima A | Bioquímica de protozoários parasitas

Resumo

Protozoários parasitas da ordem Kinetoplastida utilizam aminoácidos como fonte de carbono. Portanto, a caracterização das vias do catabolismo de aminoácidos é relevante na compreensão de como os diferentes aminoácidos são utilizados por estes organismos. No Trypanosoma brucei são encontradas a partir de análise do genoma ,8 enzimas que grande similaridade com enzimas atuando em diferentes substratos contendo acil-Coenzima A (crotonases), sendo que uma delas poderia ser a enzima responsável pela hidratação da 3-Metil glutaconil CoA, penúltima enzima da via de catabolismo de leucina. Neste projeto nos propomos a identificar através da clonagem de fragmentos gênicos preditos para os possíveis genes candidatos a codificar a 3-MGCoA hidratase e expressa-las em Escherichia coli. A obtenção das proteínas recombinante permitirá determinar qual é a enzima responsável por esta etapa da via e permitirá caracterizarmos algumas de suas propriedades bioquímicas e estruturais.