Otimização da técnica de purificação de populações de Linfócitos T CD4+ e b do sangue periférico por seleção magnética negativa com análise da viabilidade celular, recuperação, e pureza por citometria de fluxo

• Processo: 16/10083-9
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2017
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Nelson Zocoler Galante
• Beneficiário: Larissa Mitsue Okuda
• Instituição Sede: Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Nefrologia Separação imunomagnética Separação celular Linfócitos T CD4-positivos Sobrevivência celular Citometria de fluxo
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Citometria de fluxo | linfócitos B | Linfócitos T CD4 positivo | separação celular | separação imunomagnética | Nefrologia

Resumo

O monitoramento terapêutico de drogas imunossupressoras é utilizado para otimizar o efeito imunossupressor minimizando a toxicidade relacionada à exposição a níveis séricos excessivos. Mesmo sendo sistematicamente utilizado na prática clínica, um número significativo de receptores de transplante renal apresenta rejeição aguda do enxerto no primeiro ano de acompanhamento. Para aperfeiçoar o uso de drogas imunossupressoras, novas estratégias de monitoramento terapêutico estão em investigação. O monitoramento das concentrações de drogas no interior dos linfócitos do sangue periférico é considerado uma abordagem promissora porque indica a disponibilidade do fármaco diretamente no tecido alvo da imunossupressão. A separação celular magnética com anticorpos monoclonais constitui metodologia adequada para isolar linfócitos do sangue periférico, permitindo recuperar um número elevado de células em um período de tempo relativamente curto. A eficiência deste procedimento é, entretanto, variável, sendo maior quando as células de interesse estão na fração marcada (selecionadas positivamente), e menor quando estão na fração não marcada (selecionadas negativamente). Este estudo tem por objetivo otimizar a técnica de separação celular magnética por seleção negativa objetivando obtenção de suspensões de linfócitos T CD4+ e B do sangue periférico com pureza de pelo menos 95%, e analisar sistematicamente por citometria de fluxo a viabilidade celular, a recuperação e a pureza de amostras de sangue de indivíduos adultos saudáveis submetidas ao método otimizado.

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

ROMANO, PASCHOALINA; FERNANDES, MARIA DA LUZ; REZENDE EBNER, PERSIO DE ALMEIDA; DE OLIVEIRA, NAYARA DUARTE; OKUDA, LARISSA MITSUE; AGENA, FABIANA; MENDES, MARIA ELIZABETE; SUMITA, NAIRO MASSAKAZU; COELHO, VERONICA; DAVID-NETO, ELIAS; et al. UPLC-MS/MS assay validation for tacrolimus quantitative determination in peripheral blood T CD4+and B CD19+lymphocytes. Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, v. 152, p. 306-314, APR 15 2018. (16/10083-9, 16/10043-7, 15/11389-1)