Bases moleculares da toxicidade de oligomeros proteicos associados a amiloidoses do sistema nervoso

• Processo: 16/14767-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2016
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2017
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Adriano Silva Sebollela
• Beneficiário: Edson Galdino Do Nascimento Filho
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 14/25681-3 - Bases moleculares da toxicidade de oligômeros protéicos associados a amiloidoses do sistema nervoso, AP.JP
• Assunto(s): Bactérias Bioquímica de proteínas Peptídeos beta-amiloides Anticorpos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpos | bactérias | beta-amilóide | Bioquímica de proteínas

Resumo

Como previsto no Plano de Trabalho originalmente submetido à Fapesp no projeto JP, o bolsista ora contratado, Edson Galdino, graduado em Biotecnologia pela UNAERP, será responsável pela expressão e purificação dos anticorpos tipo scFv contra oligômeros de Abeta em bactérias. As cepas de E.coli a serem usadas já estão disponíveis. Caberá ao bolsista a manutenção das cepas. A expressão seguirá os protocolos descritos em Nissim et al. (1994). No formato livre de fago, a cultura será incubada a 37°C sob agitação até atingir a DO600 de 0,9, quando a expressão será induzida com IPTG. No dia seguinte, a cultura é centrifugada e o sobrenadante usado na purificação em coluna de afinidade (proteína A ou Ni, scFv expresso em fusão com cauda de histidina). Para produção de scFv's anti- AbetaOs ligados a fago, parte-se de uma cultura saturada de E.coli TG1 previamente transformada com vetor contendo gene para scFv anti-AbetaOs. Após co-infecção com helper phage KM13 e seleção com canamicina, a cultura é centrifugada e o sobrenadante contendo fagos expressando scFv na superfície é purificado por precipitação com PEG/NaCl.