Influência da insulina sobre os processos de autofagia e fagocitose em macrófagos derivados de medula óssea

• Processo: 21/04525-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2021
• Data de Término da vigência: 31 de maio de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Farmacologia - Farmacologia Geral
• Pesquisador responsável: Joilson de Oliveira Martins
• Beneficiário: Kamilla da Costa Pantoja
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCF). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Hiperglicemia Insulina Autofagia Fagocitose Diabetes mellitus Macrófagos Medula óssea
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Autofagia | diabetes | fagocitose | Insulina | Macrófagos | Medula Óssea | Farmacologia

Resumo

A hiperglicemia é uma das principais características do diabetes mellitus (DM)e está associada a alta mortalidade de indivíduos detectados. Em estudo anterior, investigamos a proteína fosfatidilinositol-3-quinase (PI3K), proteína quinase B (Akt) e as quinases ativadas por mitógenos (MAPK) em macrófagos derivados de medula óssea (BMDM) e sua participação no estímulo porlipopolissacarídeo (LPS) na presença ou não do tratamento com insulina através da secreção dos mediadores inflamatórios fator de necrose tumoral(TNF)-±, interleucina (IL)-6 e IL-10. Observou-se que a insulina, através da modulação das vias PI3K, Akt, ERK 1/2 e SAPK/JNK, amplifica o aumento da concentração de TNF-± e IL-6 sob estímulo com LPS. Além disso, a autofagia, um processo fisiológico celular necessário para a manutenção da homeostase tecidual e do organismo, mostrou ligação à fisiopatogênese do DM. Assim, nesse novo estudo investigaremos como a insulina influencia os processos de autofagia e fagocitose e a participação das vias de sinalização em BMDM de camundongos diabéticos (estreptozotocina, 65 mg/kg, i.p., 5 dias consecutivos)ou não-diabéticos sob o estímulo de LPS. Para tanto, o tratamento com insulina acontecerá concomitante ao estímulo com o LPS em 6 e 24 horas (Tessaro etal.2020), e quantificaremos as citocinas (TNF-±, IL-6 e IL-10) no sobrenadante da cultura celular utilizando o método ELISA e o NO utilizando a reação de Griess. As vias de sinalização intracelular das PIK3, AKT, PKC alpha e PKCdelta e, bem como da autofagia (BECLIN1, CLASS 3 PI3K, ULK1, LC3B)serão avaliadas pelas técnicas de Western blotting e RT-PCR. Através da atividade fagocítica e microbicida avaliaremos a funcionalidade dos BMDM e o papel da insulina nesses processos. (AU)