Influência da fosforilação de proteínas do complexo préribossomal 90s no recrutamento do exossomo e seu papel na sinalização durante o processamento e controle de qualidade dos pré-rRNAS

• Processo: 21/14620-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2022
• Data de Término da vigência: 20 de março de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Carla Columbano de Oliveira
• Beneficiário: Felipe Astolpho de Almeida
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/00901-1 - Controle pós-transcricional de expressão gênica: processamento de pré-rRNA, degradação de mRNA, splicing e montagem de snoRNPs em Saccharomyces cerevisiae, AP.TEM
• Assunto(s): Processamento pós-transcricional do RNA Expressão gênica diferencial Fosforilação de proteínas Interação proteína-proteína Proteínas ribossômicas Precursores de RNA Exossomos Saccharomyces cerevisiae
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Biossíntese de ribossomos | Interação proteína-proteína | interação proteína-RNA | processamento de RNA | Controle pós-transcricional de expressão gênica

Resumo

A fosforilação de proteínas regula a atividade, localização, estabilidade, e sua interação com outros ligantes. O processo de biogênese ribossomal é altamente complexo, sendo controlado de uma forma dinâmica pela ação de interações específicas proteína-proteína e RNA-proteínas, que são essenciais para o controle de expressão gênica. A RNase denominada exossomo tem sido o foco central de pesquisas no nosso laboratório, mas os fatores que controlam o recrutamento deste complexo ainda permanecem desconhecidos. Este projeto visa a identificação e caracterização dos sítios de fosforilação de proteínas das subunidades do exossomo e a investigação do papel dessas modificações no controle do recrutamento deste complexo para as partículas pré-ribossomais. Para isso, serão realizados pré-fracionamentos das subunidades nucleares do exossomo de Saccharomyces cerevisiae e após, os fosfopeptídeos serão purificados e enriquecidos por diferentes etapas de cromatografia e identificados por espectrometria de massas utilizando a ionização por ETD (dissociação por transferência de elétrons). Essas abordagens demonstram potencial para gerar resultados inéditos e identificar fosfoproteínas ainda não relatadas, bem como caracterizar os seus sítios de fosforilação, durante o processamento dos rRNAs. Dada a conservação evolutiva destes processos em eucariotos, esses resultados poderão ser extrapolados para humanos, nos quais doenças já foram identificadas como sendo causadas por mutações nos genes das proteínas ortólogas estudadas por este grupo de pesquisa. (AU)