Uso de duplo híbrido em bactérias para a determinação de interações proteína-proteína na infecção por bacteriófagos

• Processo: 21/15055-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Germán Gustavo Sgro
• Beneficiário: Verena Ariak Vieira Seabra
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas de Ribeirão Preto (FCFRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Bacteriófagos Micro-organismos Interação proteína-proteína Microfilamentos Microscopia eletrônica Xanthomonas citri
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Bacteriófagos | Duplo híbrido em bactéria | Interação proteína-proteína | Xanthomonas citri | Mecanismo de infecção de bacteriófagos

Resumo

O pilus do tipo IV (T4P) é um filamento fino, flexível e resistente localizado na superfície das células bacterianas. Este apêndice está envolvido em diferentes comportamentos bacterianos, incluindo motilidade por contração (twitching), adesão a superfícies, transformação natural, formação de biofilme, secreção de proteínas e quimiotaxia. Foi demonstrado previamente que a infecção do fitopatógeno Xanthomonas citri (Xac) pelo bacteriófago ¦Xacm4-11 (família Podoviridae) é dependente do T4P (Dunger et al., 2014). Mais recentemente, foram purificadas partículas virais e determinadas as estruturas de tanto o capsídeo como da cauda viral em resoluções de 3.2 + e 3.6 +, respectivamente, por microscopia eletrônica criogênica (dados não publicados). Por outro lado, também foi determinada a sequência genômica deste fago em colaboração com grupos do Instituto de Química da USP, permitindo-nos ter também as sequências dos ORFs (Open-Reading Frames) codificados por ele (dados não publicados). Apesar de tudo isso, ainda não se conhece quais proteínas do ¦Xacm4-11 são as que interagem com o T4P de Xac, e qual é o mecanismo de reconhecimento e injeção do genoma durante a infeção. Através deste projeto, pretendemos identificar algumas dessas interações proteína-proteína para assim melhorar o nosso entendimento do processo infectivo mediado por fagos. Para isto, utilizaremos a ferramenta de duplo-híbrido em bactérias (BACTH), colocando de um lado proteínas estruturais de ¦Xacm4-11, e das outras proteínas codificantes do T4P de Xac. Os resultados obtidos ajudarão a compreender melhor os mecanismos de reconhecimento e interação bactéria-fago, permitindo explorar novas alternativas para o controle de espécies bacterianas patogênicas, como Xanthomonas citri. Dunger et al., 2014: https://doi.org/10.1094/MPMI-06-14-0184-R. (AU)