Determinação de resistência a fluconazol e caspofungina em isolados clínicos de Candida parapsilosis e customização do banco para espectrometria de massa por ionização/ dessorção de matriz assistida por laser por tempo de voo (MALDI-TOF MS)

• Processo: 22/05252-7
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Microbiologia Aplicada
• Pesquisador responsável: Marcia de Souza Carvalho Melhem
• Beneficiário: Diniz Pereira Leite Junior
• Instituição Sede: Instituto Adolfo Lutz (IAL). Coordenadoria de Controle de Doenças (CCD). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 17/50333-7 - Plano de desenvolvimento institucional em pesquisa do Instituto Adolfo Lutz (PDIp), AP.PDIP
• Assunto(s): Candida Leveduras Micologia médica Resistência Micologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Candida | Leveduras | Maldi-Tof Ms | Micologia Médica | Resistência | Micologia

Resumo

Espectrometria de massa (MALDI-TOF MS) tem sido, amplamente, demonstrada como excelente ferramenta para identificação de fungos de modo rápido, preciso e exato. Este é o primeiro passo para introdução de terapia antifúngica para melhor prognóstico em casos de infecções fúngicas invasiva . O segundo passo crucial para administração de terapia antifúngica apropriada é a detecção de eventual resistência do agente etiológico aos fármacos antifúngicos. A demanda por testes de suscetibilidade a fármacos é crescente, em particular, para pacientes que estão sob terapia antifúngica, justificando a busca de métodos rápidos, como MALDI-TOF MS, para determinação de resistência. Este estudo visa investigar a tecnologia de MALDI-TOF MS para determinação de resistência em isolados clínicos de Candida parapsilosis a dois antifúngicos utilizados na prática clínica para infecções invasivas por leveduras, fluconazol e caspofungina. O método de microdiluição de referência europeu EUCASt será adotado para determinação da concentração mínima inibitória (MIC) de fluconazol e efetiva (MEC) de caspofungina. Em fenótipos de C. parapsilsosis, sensível e resistente, será investigada presença de mutações em erg e alelos de fks, genes relacionados à resistência em fluconazol e caspofungina, respectivamente. As porcentagens de concordância entre sensibilidade, a cada fármaco, e ausência de mutação, bem como, resistência e mutação(ões) gênicas será calculada. O método de MALDI-TOF MS será aperfeiçoado para estabelecer um índice de correlação composto (CCI) que analisa as relações/semelhança entre espectros gerados por dois isolados selecionados de Candida parapsilosis, selvagem e mutante, expostos a diferentes concentrações de fluconazol e caspofungina. A comparação dos espectros protêicos, obtidos na ausência e sob exposição de concentrações altas de cada fármaco, será determinada. Isso permitirá o estabelecimento da concentração mínima de mudança de perfil (MPCC), que é a menor concentração onde o espectro é mais semelhante ao gerado na concentração máxima de fármaco, em relação aquele obtido na ausência do fármaco. Desse modo, MALDI-TOF MS será estabelecido, em um instituto de referência estadual, como um método rápido para proporcionar melhor compreensão da epidemiologia da resistência de espécie, clinicamente, relevante no âmbito hospitalar. Além disso, a caracterização molecular de mutantes poderá auxiliar na busca de moléculas com potencial antifúngico dirigidas a tais populações.