Otimização do sistema de produção in vitro de embriões suínos como base para a geração de um modelo suíno geneticamente modificado

• Processo: 22/10948-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pesquisa Inovativa em Pequenas Empresas - PIPE
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2022
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2023
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Biologia Geral
• Pesquisador responsável: Andréa Cristina Basso
• Beneficiário: Andréa Cristina Basso
• Empresa: Salt Biotechnology Ltda
• CNAE: Pesquisa e desenvolvimento experimental em ciências físicas e naturais ; Atividades veterinárias
• Vinculado ao auxílio: 22/06031-4 - Otimização do sistema de produção in vitro de embriões suínos como base para a geração de um modelo suíno geneticamente modificado, AP.PIPE
• Assunto(s): Biotecnologia Fertilização in vitro Suínos Técnicas de maturação in vitro de oócitos Criopreservação Neoplasias da bexiga Repetições palindrômicas curtas agrupadas e regularmente espaçadas Modelos animais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Câncer de Bexiga | Crispr | Meio De Cultivo | Modelo Animal | Pive | Suínos | Biotecnologia

Resumo

A Produção In Vitro de Embriões (PIVE) é uma biotécnica de reprodução empregada de forma comercial e em larga escala apenas na espécie bovina, apesar da possibilidade de aplicação em várias espécies. Na espécie suína a PIVE tem sido utilizada basicamente em pesquisas, com o intuito de aprimorar conhecimentos básicos em fisiologia reprodutiva. Entretanto, a aplicação efetiva nessa espécie possibilita diversas oportunidades, como a produção de embriões suínos geneticamente editados para o estudo de doenças humanas. Para que se tenha sucesso na produção in vitro dos embriões e, posteriormente, na geração de animais geneticamente editados, é fundamental o domínio de todas as etapas da PIVE, sendo elas: 1) Maturação In Vitro de oócitos (MIV); 2) Fertilização In Vitro (FIV); 3) Cultivo In Vitro de embriões (CIV); e 4) criopreservação de embriões. A PIVE de suínos avançou significativamente na última década, todavia, a incidência de anormalidades cromossômicas decorrentes das altas taxas de polispermia em conjunto com a ineficiência dos meios de cultivo disponíveis são apontados como os principais impasses para padronizar e aumentar os índices de desenvolvimento embrionário, bem como a qualidade dos embriões gerados no laboratório. Atualmente, a PIVE suína carece de meios de cultivo específicos, validados e disponíveis comercialmente para essa finalidade. Assim, objetivamos desenvolver e validar meios de cultivo para todo o processo de produção in vitro de embriões suínos, desde a maturação oocitária até o congelamento embrionário. Ademais, através do desenvolvimento e validação de protocolos mais eficientes e padronizados, em conjunto com meios de cultivo ideais para produção de embriões suínos, a empresa SALT BIOTECH além de acrescentar um novo produto ao seu portfólio, também poderá capitalizar totalmente o poder de novos métodos, como a geração de suínos geneticamente modificados. Para isso, pensando em um primeiro modelo, propomos também desenvolver in silico os componentes necessários para a futura produção de um modelo suíno inovador para o estudo do Câncer de Bexiga, no qual serão knockouteados os conhecidos supressores tumorais PTEN e CDKN2A. O projeto será realizado em sua totalidade na empresa SALT BIOTECH e o trabalho proposto será dividido em 2 experimentos: produção e validação de meios de cultivo para PIVE suína e desenho e validação in silico de plasmídeos CRISPR e RNAs guia para realizar o knockout dos genes alvo. (AU)