Identificação, caracterização e produção de células-tronco derivadas de membrana amniótica para aplicação em doenças de superfície ocular

• Processo: 23/07094-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2023
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2026
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Mônica de Cássia Alves
• Beneficiário: Caroline Nascimento Barquilha
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 21/04045-5 - Avaliação de novas técnicas de terapia celular em doenças de superfície ocular, AP.JP2
• Assunto(s): Células-tronco Cultura de células Oftalmopatias Oftalmologia
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: célula-tronco | cultura celular | Doenças Oculares | Membrana aminiótica | Oftalmologia | Oftalmologia

Resumo

As doenças de superfície ocular (DSO) em suas formas mais graves, como olho seco, queimaduras químicas, deficiência de células limbares e doença neurotrófica, ainda possuem grandes desafios de tratamento. Na busca pela medicina regenerativa e de precisão, diversos tipos celulares e fontes tem sido descobertas, analisadas e usadas em estudos experimentais, pré-clínicos e clínicos, como as células-tronco (CT) adultas. Essa população celular tem se mostrado promissora devido à sua capacidade de indiferenciação, clonogenicidade, auto-renovação e potencial de diferenciação, além de características imunomoduladoras e pró-angiogênicas. Uma fonte celular interessante, no qual o tecido por si só já é amplamente utilizado em curativos oftalmológicos, é a membrana amniótica (MA). As CT-MAs são consideradas uma fonte segura, efetiva, tecnicamente fáceis de serem coletadas, isoladas e amplificadas para uso em terapia celular oftalmológica, porém esses processos ainda não foram padronizados. Assim, o presente projeto se dedica a padronização dos processos de coleta, isolamento, cultivo, caracterização e criopreservação de CT-MA em condições GMP (Good Manufacturing Practices) para que possam ser utilizadas em futuros estudos pré-clínicos e clínicos. Para isso, amostras de MA serão coletadas a partir de 10 placentas humanas. Serão testados e validados diferentes protocolos de processamento (digestão enzimática, dissociação mecânica, explante das células), além da investigação das taxas de duplicação celular, ciclo celular, senescência celular e estabilidade genética. Ainda, serão realizadas análises morfológicas através de microscopia e imunocitoquímica, análise imunofenotípica por citometria de fluxo, checagem do Potencial de Diferenciação Tri linhagem (osteogênica, adipogênica e condrogênica), extração de RNA para análise de RT-PCR. As respectivas análises estatísticas serão realizadas considerando cada variável (dados paramétricos, não-paramétricos ou multifatoriais). Ainda, alíquotas serão armazenadas a cada passagem para compor um biobanco dessas células. Em cada etapa será feito um controle rigoroso para garantir a qualidade dos processos, desde a checagem de todos os exames microbiológicos e sorológicos de cada paciente que doará a MA, bem como o controle microbiológico para cultivo celular. Nossa hipótese é que as CT-MA podem para atuar regenerando a superfície ocular e serem utilizadas na terapia celular de DSO. Esperamos que com a aplicação deste desenho experimental, seja possível a obtenção de um banco de CT-MA humanas em condições para aplicações clínicas.