Papel da galectina-3 na regulação do inflamassoma nlrp3 na resposta alérgica: estudo em modelos in vivo e in vitro

• Processo: 22/07848-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2023
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2024
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Histologia
• Pesquisador responsável: Cristiane Damas Gil
• Beneficiário: Renata Pereira Lourenço
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Caspase 1 Células HaCaT Conjuntivite alérgica Imuno-histoquímica Inflamação
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Caspase-1 | Células HaCaT | conjuntivite alérgica | Il-1B | imuno-histoquímica | Mapk14 | Inflamação

Resumo

O NLRP3 é um receptor citoplasmático que, quando ativado, forma um complexo proteico denominado inflamassoma, constituído pelo NLRP3, caspase-1 e uma proteína adaptadora (ASC), e responsável por atuar na liberação de IL-1b e IL-18. Assim, o inflamassoma NLRP3 participa da patogênese de muitas doenças, incluindo reações alérgicas, tais como asma, dermatite atópica, rinite e conjuntivite alérgica (CA). Estudos mostram que o eixo NLRP3/IL-1b desempenha um papel importante no desenvolvimento da CA. Ademais, a expressão da proteína Gal-3 desempenha um importante papel na ativação do inflamassoma NLRP3 e na produção de IL-1b pelos macrófagos, no entanto, sua relaçãocom a ativação do NLRP3 não foi investigada na resposta alérgica. Assim, neste projeto, avaliaremos o papel da Gal-3 na resposta alérgica e sua possível relação com a regulação do inflamassoma NLRP3, utilizando modelo experimental de CA e ensaios com cultura de queratinócitos humanos estimulados com IL-4. No modelo experimental de CA induzida por ovalbumina (OVA), serão utilizados camundongos Balb/c selvagens (WT) e nocautes para Gal-3 (Gal-3-/-) e avaliadas as conjuntivas palpebrais nas seguintes condiçõesexperimentais (n = 5 animais/grupo): Sham (controle) e CA. Nessas condições, analisaremos: i) histopatologia das pálpebras e quantificação de células inflamatórias; ii) localização e possível modulação da expressão do NLRP3, caspase-1 e IL-1b por meio de imuno-histoquímica; e iii) possível co-localização do NLRP3 nos mastócitos por imunofluorescência. Além disso, avaliaremos, in vitro, o efeito da administração da Gal-3recombinante em queratinócitos humanos, linhagem HaCaT, estimulados por IL-4. Na cultura celular, serão realizados ensaios de viabilidade celular, bem como dosagem de IL-1b e investigação da expressão de NLRP3, caspase-1 e quinase p38 (MAPK14). Nos transcriptomas publicamente disponíveis do repositório Gene Expression Omnibus (GEO), avaliaremos os níveis transcricionais de LGALS3, NLRP3, CASP1 e MAPK14 em estudosque envolvam ensaios in vitro com mastócitos e queratinócitos relacionados com respostas alérgicas. Os resultados contribuirão para o melhor entendimento do papel da Gal-3 na ativação do inflamassoma NLRP3 na resposta alérgica, assim como poderão indicar possíveis alvos terapêuticos para os processos alérgicos oculares.