Desenvolvimento de estratégias integradas para a purificação de partículas lentivirais

• Processo: 24/01305-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Mestrado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2024
• Situação: Interrompido
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Medicina - Clínica Médica
• Pesquisador responsável: Virginia Picanço e Castro
• Beneficiário: Camilly Melo Garcia Ferreira
• Instituição Sede: Hemocentro de Ribeirão Preto. Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto da USP (HCMRP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 20/07055-9 - Núcleo de Terapia Celular - NuTeC, AP.NPOP
• Bolsa(s) vinculada(s): 24/22467-2 - Geração de Células CAR-NK Direcionadas ao CD19 Derivadas de Fontes Primárias Usando CRISPR/AAV, BE.EP.MS
• Assunto(s): Terapia baseada em transplante de células e tecidos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Células feeder | Células NK primárias | receptor de antígeno quimérico | terapia celular | Terapia Celular

Resumo

Nos últimos anos, nosso grupo de pesquisa têm dedicado esforços à implementação da terapia com células T-CAR no Hemocentro-RP. Com o apoio da Fapesp (projeto NPOP 2020/07055-9), avançamos significativamente na produção de vetores lentivirais destinados ao projeto de células CAR-T, o qual iniciaremos o estudo clínico I/II aprovado pela ANVISA, ainda este ano. Desde o início do projeto NPOP, destacamos progressos notáveis na produção de partículas lentivirais. Atualmente, nossa plataforma de LV possui a capacidade de produzir lotes de até 4 litros, os quais passam por um processo de downstream para purificação e concentração das partículas de LV. Não há dúvidas de que o uso de células T autólogas com receptores quiméricos de antígeno (CAR) revolucionou o tratamento de neoplasias hematológicas. No entanto, essa terapia ainda enfrenta desafios, como custos elevados e complexa manufatura. A imunoterapia com células NK oferece a perspectiva de uma abordagem alogênica "pronta para uso", de custo mais acessível e disponível para um número maior de pacientes. As células NK têm vantagens intrínsecas, como a capacidade de eliminar células tumorais sem desencadear a doença do enxerto contra o hospedeiro, uma preocupação comum nas terapias com células T alogênicas. Recentemente, nosso grupo desenvolveu o CAR.CD19-IL15/IL15R± (patente BR1020220083339) e toda a prova de conceito foi realizada em células NK de linhagem (NK-92) demonstrando que a citocina IL-15 desempenha um papel fundamental na expansão e citotoxicidade (Silvestre et al., 2023). O próximo passo é testar a efetividade deste vetor em NK primárias. As NK primárias destacam-se como candidatas promissoras para a imunoterapia, embora a expansão ex-vivo dessas células permaneça um desafio. A transferência adotiva de células NK, apesar de suas vantagens, enfrenta obstáculos, incluindo a dificuldade em obter um número suficiente de células para tratamento, persistência insuficiente, fraca expansão in-vivo e atividade antitumoral limitada das células infundidas. Portanto, o principal desafio nesse campo reside na obtenção de células NK em quantidade e qualidade adequadas para a imunoterapia adotiva. Neste contexto, apresentamos uma proposta inovadora para a produção em larga escala de células NK primárias, preservando sua atividade antitumoral. Desenvolvimento de terapias alogênicas está previsto no projeto NPOP na meta Inovações estratégicas de médio-longo prazo. Este projeto de mestrado visa utilizar nossa plataforma de LV para produzir o nosso vetor CAR, o CAR.CD19-IL15/IL15Ra, específico para células NK, seguindo a o plano de atividades anexado. No entanto, pretendemos seguir adiante com a expansão de células NK primárias e avaliar sua eficiência de transdução. Neste projeto, além da produção de partículas lentivirais, será estabelecido um método de cultivo apropriado para as células NK primárias (NK-PB ou NK-CB), com testagem de diferentes meios, sistemas de cultivo, suplementação e células feeder. Após a expansão, as células serão avaliadas quanto ao seu perfil imunofenotípico e potencial citotóxico. Com o cultivo estabelecido, as células NK serão modificadas com o nosso vetor lentiviral, contendo a sequência CAR anti-CD19 co-expressando IL-15/IL-15R±, para potencialização da resposta anti-tumoral. As células NK-CAR serão testadas quanto ao seu potencial citotóxico contra células tumorais CD19+ e CD19- in-vitro. O estabelecimento eficaz desse sistema de expansão ex-vivo de células NK representará uma contribuição significativa para a aplicação clínica dessas células.