Cultivo e multiplicação de células germinativas primordiais em membranas corioalantóides de embriões de galinha

• Processo: 24/12988-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2024
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: Ricardo Jose Garcia Pereira
• Beneficiário: Matheus Moraes Azevedo
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia (FMVZ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Biotecnologia Células germinativas Cultura de células Membrana corioalantoide Reprodução
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: biotecnologia | células germinativas | Cultivo celular | Membrana corioalantoide | Reprodução | Reprodução de Aves

Resumo

As células germinativas primordiais (PGCs, do inglês primordial germ cells) são as únicas células capazes de transmitir a informação genética ao longo de várias gerações. Esta característica se deve ao potencial de autorrenovação e diferenciação celular, no qual estas células são capazes de originar milhões de espermatozóides e oócitos. Dessa maneira, o uso das PGC tem gerado metodologias promissoras na preservação de recursos genéticos, por meio de transplante intra e interespecíficos. Todavia, o uso de tais metodologias ainda é limitado devido a manutenção e multiplicação das PGCs in vitro e os custos atrelados ao seu cultivo em laboratório. Assim, o presente projeto propõe avaliar a eficiência do cultivo de PGCs de frango sobre a membrana corioalantóide (CAM) de embriões de galinha, visando um método alternativo e de baixo custo para o cultivo destas células. Para tal, PGCs de frango serão coletadas através da corrente sanguínea de embriões com 2-3 dias de incubação e cultivadas in vitro com o propósito de seleção de linhagens com crescimento exponencial. Em seguida, linhagens que atingirem um número mínimo de 150.000/ mL células serão diluídas e injetadas (aproximadamente 10.000 células /10 ¼L) sobre a membrana corioalantóide de embriões de galinha. Concomitantemente, o mesmo número de células (10.000 células/ poço) serão semeadas em placas de cultivo de 48 poços e cultivadas como controle. As taxas de crescimento, viabilidade e expressão de marcadores germinativos (SSEA-1, VASA e EMA-1) serão avaliadas após 10 dias de incubação. Esperamos com esse experimento elaborar um protocolo prático de cultivo in ovo de PGCs capaz de manter as células viáveis e indiferenciadas a um baixo custo laboratorial.