Geração e caracterização da linhagem transgênica tg(lyz: mCherry) em zebrafish.

• Processo: 24/20460-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Morfologia - Citologia e Biologia Celular
• Pesquisador responsável: Hernandes Faustino de Carvalho
• Beneficiário: Raffael Rotta Bindi
• Instituição Sede: Instituto de Biologia (IB). Universidade Estadual de Campinas (UNICAMP). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Macrófagos Transgenia Peixe-zebra
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: lyz | Macrófagos | transgenia | Zebrafish | Zebrafish

Resumo

O zebrafish é um ótimo modelo para estudar doenças de origem genética por compartilhar grandes semelhanças genéticas e moleculares com humanos. Em especial, a transgenia e o estudo de processos que envolvam as células hematopoiéticas têm sido amplamente estudados usando este peixe como modelo. Os macrófagos são células que podem ter origem embrionária e hematopoiética e possuem seu desenvolvimento bastante conservado com o zebrafish pela própria ontogenia do sangue. Assim, mesmo que alguns órgãos mudem eles são equivalentes para suas funções hematopoiéticas, como é o caso do tecido hematopoiético caudal, em zebrafish, e o fígado fetal, em humanos. Em paralelo, muito se tem discutido sobre a função de macrófagos associados a tumores (TAMs), se eles estariam em defesa do corpo ou contribuindo para o ambiente tumoral por suas funções relacionadas a angiogênese e remodelação da matriz extracelular. Recentemente, foi elucidado que os macrófagos presentes na próstata após a castração são responsáveis pela indução da apoptose de células epiteliais. Neste contexto, pretendemos criar uma linhagem transgênica em zebrafish que marque macrófagos através de um gene repórter tg(lyz: RFP). Dessa forma, acreditamos que conseguiremos realizar pesquisas futuras com esta linhagem, como por exemplo através xenotransplante de células tumorais prostáticas em zebrafish onde, se for usado esta linhagem, será possível observar o comportamento dos macrófagos in vivo. Acreditamos que região promotora do gene da Lisozima tipo C (lyz) seja adequada para dirigir a expressão do gene repórter RFP (Red Fluorescent Protein), por apresentar expressão específica em macrófagos em zebrafish. Cerca de 3 KB upstream do gene lyz já foi utilizado para gerar essa linhagem transgênica e mostrou expressão específica em macrófagos, contudo, pretendemos primeiramente realizar análises in silico para verificar estes dados e determinar a possível região promotora. Em seguida produziremos um constructo, utilizando a técnica de transgenia Tal2, para injetar nos embriões de zebrafish e gerar uma linhagem F0 transgênica. Após estes peixes chegarem na idade reprodutiva, iremos cruzar com peixes with type (WT) para gerar a geração F1. Também acompanharemos e realizaremos a aquisição de fotos para analisar a morfologia, comportamento e migração das células RFP+ para confirmar que são macrófagos e a especificidade do promotor. Desta maneira, pretendemos estabelecer uma linhagem transgênica tg(lyz: RFP) para continuar sendo perpetuada no biotério do INFABIC e ser empregada em estudos diversos que envolvem os macrófagos, inclusive no acompanhamento da biologia de xenotransplantes.