Estudos bioquímicos e estruturais da proteína humana DDX3X

• Processo: 25/04023-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2025
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Química de Macromoléculas
• Pesquisador responsável: Ivan Rosa e Silva
• Beneficiário: Eric Leandro Lima Mendonça
• Instituição Sede: Centro Nacional de Pesquisa em Energia e Materiais (CNPEM). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Cristalografia de raios X Biologia estrutural
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Cristalografia de raios X | DEAD box | Helicase de RNA | Biologia Estrutural

Resumo

A enzima DDX3X é uma helicase de RNA dependente de ATP da família DEAD-box que desempenha um papel crucial no metabolismo de RNA, em especial em processos do neurodesenvolvimento. Esta proteína é composta por dois domínios do tipo RecA que compõem as regiões de ligação a ATP e RNA flanqueadas por extremidades N- e C-terminais flexíveis. A hipótese deste trabalho é de que tais extremidades podem regular as funções enzimáticas da DDX3X a partir de sua interação com o domínio estruturado. Portanto, o objetivo geral deste trabalho é estudar a relação estrutura-função da proteína truncada na região N-terminal por meio de cristalografia de proteínas e ensaios enzimáticos. O grupo de pesquisa já estabeleceu protocolos de expressão, purificação e cristalização de construções truncadas da proteína DDX3X e irá fornecer amostras de proteína recombinante purificada para a execução deste projeto. A atividade enzimática da proteína será estudada a partir de espectroscopia de absorção de UV do produto da reação enzimática de ATPase em uma reação acoplada. Vamos otimizar condições de cristalização iniciais e os cristais serão difratados com raios X na linha de luz Manacá-Sirus (LNLS-CNPEM). A estrutura da proteína truncada será obtida pelo método de substituição molecular e refinada. Os resultados deste projeto possibilitarão o esclarecimento dos mecanismos moleculares de regulação da função da proteína DDX3X. (AU)