Investigação morfofuncional do tráfego intracelular e secreção de proteínas portadoras da sequência KDEL

• Processo: 25/16475-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Programa Capacitação - Treinamento Técnico
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 2025
• Data de Término da vigência: 31 de agosto de 2026
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Francisco Rafael Martins Laurindo
• Beneficiário: Lívia Teixeira
• Instituição Sede: Instituto do Coração Professor Euryclides de Jesus Zerbini (INCOR). Hospital das Clínicas da Faculdade de Medicina da USP (HCFMUSP). Secretaria da Saúde (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 13/07937-8 - Redoxoma, AP.CEPID
• Assunto(s): Microscopia eletrônica de transmissão Retículo endoplasmático
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Célula Muscular Lisa Vascular | Microscopia eletrônica de transmissão | Proteína Dissulfeto Isomerase | Remodelamento de Matriz extracelular | Retículo endoplásmatico | Sequência KDEL | Tráfego intracelular de proteínas

Resumo

A maioria das proteínas do retículo endoplasmático (RE) possui um motivo C-terminal do tipo KDEL, que as direciona de volta ao RE 1 a partir do aparelho de Golgi pelos receptores de KDEL (KDELr) 2. No entanto, essas proteínas são frequentemente detectadas extracelularmente, adsorvidas à membrana plasmática ou secretadas. Ao alcançarem a superfície celular, atuam como mediadores importantes na comunicação célula-célula, na modulação da resposta imune, na adesão celular, entre outros 3. Entretanto, os mecanismos que permitem o escape de proteínas residentes do RE para a superfície celular não são totalmente elucidados. Para investigar esse fenômeno, propomos utilizar um constructo que liga a horseradish peroxidase (HRP) ao motivo KDEL (ssHRPKDEL). Através da análise por microscopia eletrônica de transmissão, esse sistema permitirá marcar ultrastruturalmente, via oxidação de diaminobenzidina (DAB) em presença de H¿O¿, os compartimentos intracelulares por onde proteínas residentes do RE transitam durante seu desvio para a membrana plasmática. Paralelamente, com o mesmo constructo, pretendemos desenvolver um ensaio colorimétrico baseado na quantificação da atividade de ssHRPKDEL no sobrenadante de culturas celulares. O desenvolvimento de um ensaio colorimétrico sensível e reprodutível permitirá a triagem de estímulos e inibidores da secreção dessas proteínas, além da posterior caracterização das vias de sinalização que regulam a secreção não convencional de proteínas do RE, incluindo a proteína de interesse do nosso grupo, PDIA1. (AU)