Sub-clonagem, expressão e purificação da proteína humana CLASP2, que interage com FEZ1, para estudos funcionais e estruturais

• Processo: 07/01353-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de julho de 2007
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Jörg Kobarg
• Beneficiário: Camila Haynes Abrile
• Instituição Sede: Associação Brasileira de Tecnologia de Luz Síncrotron (ABTLuS). Ministério da Ciência, Tecnologia e Inovação (Brasil). Campinas , SP, Brasil
• Assunto(s): Purificação de proteínas Expressão de proteínas Proteína FEZ1 humana Interação proteína-proteína Transporte proteico
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: crescimento de axons | interação entre proteínas | microtubuli | proteína regulatoria | Transporte | Análsie funcional e estrutral de proteínas

Resumo

A proteína humana FEZ1 (fasciculation and elongation protein 1) é ortóloga a proteína UNC-76 de Caenorhabditis elegans, a qual é necessária para desenvolvimento de células neuronais neste nematóide. Estudos anteriores mostram que a proteína FEZ1 interage com a PKC (protein kinase C), DISC1 (disrupted-in-schizophenia1), agnoproteína do poliomavirus humano JC, é um elemento fundamental no funcionamento da proteína kinesina-1 e na movimentação de mitocôndrias em células neuronais. Nosso grupo descreveu anteriormente que FEZ1 e seu parálogo FEZ2 são proteínas que interagem com NEK1 (NIMA related kinase 1), uma proteína quinase envolvida na doença renal policística e em mecanismos de reparo na fase G2/M do ciclo celular. Um ensaio de duplo-híbrido, utilizando-se uma biblioteca de cérebro fetal humano identificou 16 proteínas que interagem com a região 221-392 de FEZ1. As 13 proteínas com função conhecida participam de processos como: regulação da transcrição gênica e remodelagem da cromatina (7 proteínas), regulação do desenvolvimento de neurônios (2 proteínas), participam da apoptose (2 proteínas), ou mecanismos de transporte celular (3 proteínas), incluindo a proteína CLASP2. Neste projeto pretende-se expressar um fragmento e a proteína inteira CLASP2 que interage com FEZ1 para estudos funcionais e estruturais. CLASP2 apresenta papel importante no crescimento do cone de microtúbulos, está associada ao processo de divisão celular e pode participar do transporte de proteínas e organelas. FEZ1 está associada a processos de elongação dos axônios e este processo provavelmente depende do transporte associado a microtúbulos, sugerindo assim uma possível associação funcional entre FEZ1 e CLASP2. Estudos estruturais (cromatografia de exclusão molecular, dicroísmo circular, cristalografia) de CLASP2 e do possível complexo dela com FEZ1 serão realizados. Além disso, planejamos também estudos funcionais (co-localização in vivo, ensaios de co-precipitação etc.) com o intuito caracterizar a possível função da interação entre CLASP2 e FEZ1 em processos de transporte. (AU)