Desenvolvimento da tecnica aflp para identificacao de genotipos de "xylella fastidiosa" entre diferentes isolados bacterianos: estudo da relacao planta-patogeno.

• Processo: 01/05355-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Paulo Inácio da Costa
• Beneficiário: Leiliane Kelline de Souza
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Farmacêuticas (FCFAR). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araraquara. Araraquara , SP, Brasil
• Assunto(s): Xylella fastidiosa DNA genômico Polimorfismo genético Análise do polimorfismo de comprimento de fragmentos amplificados Polimorfismo de fragmento de restrição
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Aflp | Dna Genomico | Polimorfismo Genetico | Rflp | Xylella Fastidiosa

Resumo

O polimorfismo genético entre diferentes isolados bacterianos do gênero X. fastidiosa, citros, cafeeiro, ameixeira norte-americana e videira brasileira e norte-americana, será estudado. A metodologia AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) deverá ser desenvolvida no sentido de se amplificar uma região DNA genômico-específica, usando os oligos-iniciadores denominados de 272-1 e 272-2 (Pooler e Hartung, 1995b), e, submetê-la ao estudo de polimorfismo do fragmento de restrição. O produto amplificado (+/- 700pb), proveniente de cada isolado bacteriano, será submetido à restrição com a enzima Hha I (isosquizômero da Cfo I) e posteriormente o "fingerprinting" analisado em eletroforese em gel de poliacrilamida/TBE na ausência de uréia. O padrão polimórfico, obtido em qualquer um dos isolados, será submetido ao sequenciamento da região flanqueada pelos oligo-iniciadores 272-1/272-2, para posterior caracterização do genótipo correspondente. No caso dos isolados de citros e cafeeiro, a presença de padrão polimórfico levará ao estudo da relação planta-patôgeno, o qual será conduzido em estufa de crescimento ou câmara de vegetação, procedimento que será realizado em colaboração com o Dr. Wenbin Li (Pesquisador do FundeCitrus e coordenador do projeto Genoma Funcional Proc. 99/04345-3). (AU)