Avaliacao do efeito do pth e da vitamina d3 sobre o promotor do gene nhe3 (trocador de na+/h+tipo 3).

• Processo: 99/10126-2
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2000
• Data de Término da vigência: 31 de janeiro de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nancy Amaral Reboucas
• Beneficiário: Gisele Arnaudin Grossmann
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 95/04628-4 - Estudo molecular e funcional de transportadores de íons em membranas, AP.TEM
• Assunto(s): Paratormônio Colecalciferol Proteínas de fluorescência verde Trocadores de sódio-hidrogênio
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Ok | Gfp | Nhe | Paratormonio | Trocador Na+/H+ | Vitamina D3

Resumo

Um segmento de aproximadamente 3 kpb correspondente à região flanqueadora 5'do gene -NHE3 de rato será obtido por PCR e clonado em plasmídeo BlueScript. Após confirmação da seqüência de nucleotídeos, o fragmento será transferido para o vetor -pEYFP-1 (Clontech) que tem como gene repórter uma Green Fluorescence Protein (GFP) de Aequorea victoria, clonado neste vetor sem um promotor. Nosso fragmento de DNA, correspondente à região promotora do gene NHE3 será inserido no vetor de modo a funcionar como um promotor para o gene-GFP. O vetor pEYFP-1, sem o promotor (controle) e com o promotor de NHE3, será transfectado em uma linhagem celular de túbulos proximais renais de opossum (OK-cells). A atividade do promotor será avaliada, na ausência e na presença de PTH ou vitamina D3, pelo nível de expressão do gene repórter - GFP, através da intensidade de fluorescência detectada nas células transfectadas. (AU)