Diagnóstico genético pré-implantacional em embriões bovinos pela técnica de PEP-PCR (Primer Extension Preamplification - Polymerase Chain Reaction)

• Processo: 01/09195-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2001
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2003
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Reprodução Animal
• Pesquisador responsável: José Fernando Garcia
• Beneficiário: Rodrigo Vitorio Alonso
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia (FOA). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Araçatuba. Araçatuba , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 97/13372-9 - Identificação de polimorfismo de DNA em genes relacionados com o desenvolvimento corporal e precocidade sexual em bovinos, AP.JP
• Assunto(s): Diagnóstico pré-implantação Embrião de animal Bovinos Reação em cadeia por polimerase (PCR) Eletroforese em gel

Resumo

Os objetivos deste trabalho são a adaptação da metodologia de PEP-PCR para o diagnóstico genético pré-implantacional através da determinação de diferentes loci gênicos (FSHR, LHR, GnRHR), DNA microssatélites [ETH10, TGLA126, RM067, SPS115, INRA023, ETH225] e região Y específica (BRY.4a) de blastômeros isolados de embriões bovinos, pela técnica de PEP-PCR. Serão utilizados 50 embriões bovinos em estágio de blastocisto, fertilizados e cultivados in vitro. Os embriões sofrerão micromanipulação para a retirada das biópsias (blastômeros), passarão por processo de lise das células e então serão submetidos aos protocolos de PEP (Primer extension preamplification) e PCR, seqüencialmente. Os resultados serão obtidos através da análise dos dados provenientes da eletroforese em gel de agarose. As regiões DNA microssatélites amplificadas por PCR serão submetidas ao analisador automático de fragmentos de DNA. Os resultados obtidos em ambos os métodos serão utilizados para determinar a eficiência da técnica de PEP-PCR através do cálculo das porcentagens de amplificação para cada região avaliada nos 50 embriões. Será aplicado o teste Chi-quadrado ou teste exato de Fisher para verificar a associação entre a qualidade da biópsia e os padrões eletroforéticos observados. (AU)