Producao de anticorpos monoclonais contra o virus da bronquite infecciosa das galinhas pela tecnica de phage display.

• Processo: 02/08649-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2002
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2004
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Medicina Veterinária - Medicina Veterinária Preventiva
• Pesquisador responsável: Helio Jose Montassier
• Beneficiário: Patrícia Emília Naves Givisiez
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências Agrárias e Veterinárias (FCAV). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Jaboticabal. Jaboticabal , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 01/14950-3 - Bronquite infecciosa das galinhas: interações entre variabilidade genética e antigênica em estirpes do vírus da bronquite infecciosa e reflexos sobre a imunidade, o imunodiagnóstico e a imunoprofilaxia, AP.TEM
• Assunto(s): Técnicas de diagnóstico molecular Variantes genéticas Anticorpos monoclonais Phage display
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Anticorpos Monoclonais | Diagnostico Molecular | Phage Display | Variantes Geneticas

Resumo

O presente projeto pretende desenvolver fragmentos de cadeia simples da região variável (scFv) de imunoglobulinas de aves pela técnica de phage display. Aves serão imunizadas com amostras vacinal (H120) e duas amostras de campo do VBI (A034 e UEL809). O RNA total das células da Bursa de Fabricius e do baço será isolado e usado na síntese da primeira fita do cDNA. Esta será utilizada na PCR para amplificação da região variável das cadeias leve (VL) e pesada (VH) que serão unidas em outra PCR, formando um só produto final (VH-linker-VL). O produto será clonado no vetor pComb3X e este será utilizado na transformação de bactérias ER2537 e TOPIOF'. Os fagos serão recuperados e os scFv submetidos à seleção por afinidade (biopanning), onde será avaliada sua capacidade de ligação ao antígeno. Ciclos repetidos de amplificação-seleção-eluição serão realizados, permitindo um ajuste fino da ligação antígeno-anticorpo. Os scFv de alta afinidade produzidos poderão ser utilizados em estudos posteriores com as amostras de VBI usadas inicialmente e também na caracterização de outras amostras virais. (AU)