Aplicação da técnica de Splicing Overlap Extension (SOE) para a geração de mutantes alterados no gene oppA de Streptococcus mutans

• Processo: 04/12880-6
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de fevereiro de 2005
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Molecular e de Microorganismos
• Pesquisador responsável: Rita de Cássia Café Ferreira
• Beneficiário: Roberto Nepomuceno de Souza Lima
• Instituição Sede: Instituto de Ciências Biomédicas (ICB). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Streptococcus Streptococcus mutans Alelos Mutação Oligopeptídeos Genética reversa
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Knockout | Lipoproteina | Mutantes | Oligopeptideos Permeasea | Sistema Opp | Streptococcus

Resumo

A permease para oligopeptídeos (Opp) representa o principal sistema de captação de peptídeos, encontrado em bactérias gram-positivas e gram-negativas, capaz de transportar moléculas compostas de três a vinte resíduos de aminoácidos, necessários para a nutrição, síntese da parede e comunicação intercelular. Análise do genoma completo de Streptococcus mutans UA 159 revelou a presença de quatro genes (oppA, oppB, oppC, oppD e oppF) relacionados a esse sistema de transporte Opp, organizados em um único operon. O principal objetivo deste projeto é obtenção de, em primeiro lugar, alelos mutados do gene oppA e, em segundo lugar, obter mutantes de S. mutans alterados no gene oppA após evento de dupla recombinação por meio da técnica de "splicing overlap extension" e da utilização de vetor plasmidial com replicação termo-sensível. Esta técnica consiste de uma nova metodologia baseada em genética reversa que permite o estudo do papel funcional de determinados genes com a utilização de deleção de fragmentos gênicos e ausência de efeitos polares. A partir da obtenção do mutante, testes funcionais serão realizados na busca de um melhor entendimento do papel deste sistema de captação na fisiologia e patogenicidade bacteriana. (AU)