Caracterizacao molecular da subunidade catalitica da serina/treonina fosfatase tipo 1 de dictyostelium discoideum (ddpp1c).

• Processo: 99/06710-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de setembro de 1999
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Aline Maria da Silva
• Beneficiário: Paulo Adriano Zaini
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Proteínas recombinantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Mutagenese Sitio Dirigida | Proteina Fosfatase | Proteina Recombinante

Resumo

A seqüência de aminoácidos deduzida do cDNA da subunidade catalítica da serina/treonina fosfatase tipo 1 (PPlc) de Dictyostelium discoideum (Dd) apresenta alta identidade (-80%) com seqüências de PPlc de outros organismos. Entre as diferenças observadas está a presença de uma fenilalanina na posição 269, que é equivalente a posição onde normalmente é encontrado um resíduo de cisteína. Esta cisteína, conservada em todas as outras PPlc sequenciadas, localiza-se em uma região do domínio catalítico da molécula que provavelmente participa na interação com inibidores específicos. O objetivo deste projeto consiste em mutagenizar o códon 269 (F269) do cDNA da PPlc de D.discoideum (DdPPlc) para um códon de cisteína (F269C) e comparar as propriedades enzimáticas de ambas as formas recombinantes da DdPPlc, obtidas pela expressão do cDNA selvagem e mutado em bactérias. Este tipo de estudo será acompanhado da modelagem molecular das estruturas tridimensionais tanto da proteína selvagem como da mutada. (AU)