Verificacao da apoptose e proliferacao celular em gestacoes de clones bovinos que expressam a proteina fluorescente verde (gfp).

• Processo: 06/04517-4
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 2006
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Agrárias - Zootecnia
• Pesquisador responsável: Flávia Thomaz Verechia Pereira
• Beneficiário: Silmara Marcolino da Silva
• Instituição Sede: Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus Experimental de Dracena. Dracena , SP, Brasil
• Assunto(s): Proliferação celular Apoptose Bovinos Embrião Células clonais
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Bovinos | Clones | Embrioes | Proliferacao Celular | Histologia e Embriologia

Resumo

A utilização da proteína fluorescente verde (GFP) como marcador de células de origem fetal nas placentas de clones bovinos servirá de modelo inédito para estudo morfofisiológico e imunológico da interação materno-fetal, visto que possibilitará o seu mapeamento, diferenciando as células fetais das maternas. Tal modelo terá aplicação direta, principalmente porque estes são animais que apresentam problemas em relação ao seu desenvolvimento. Com o auxílio deste modelo, pretendemos verificar a morte celular programada (apoptose), bem como sua correlação com a proliferação celular no início de gestação. Para tanto utilizaremos 08 bovinos clonados e 08 bovinos de fertilização in vitro (FIV) e 30 bovinos de inseminação artificial (IA) ou monta natural com idade até 90 dias de gestação, os quais terão seu desenvolvimento interrompido mediante abate humanitário das receptoras e recuperação do útero gestante. Serão coletados os placentônios, carúnculas e áreas intercarunculares. Uma parte das amostras será recortada e fixada, por imersão, em solução aquosa de parafolmaldeído a 4% ou formoldeído a 10% em tampão fosfato de sódio (PBS) a 0,1M pH 7.4, solução de Zamboni (4% de paraformoldeído, 15% de ácido pícrico, em tampão fosfato de sódio a 0,1M pH 7.4), metacarn (60% de metanol, 30% de clorofórmio, e 10% de ácido acético glacial), para verificação da morfologia e realização de imuno-histoquímica. Uma parte das amostras será ainda coletada em nitrogênio líquido para a realização da técnica de imuno-histoquímica em cortes congelados. Os resultados obtidos serão comparados entre bovinos clonados, FIV, de IA ou monta natural para auxílio da detecção das razões de tantas alterações placentárias, perdas embrionárias, abortos espontâneos, mortalidade pós-natal e síndrome do bezerro grande em animais manipulados em laboratório.