A sintese proteica e necessaria para a infeccao de celulas de cultura por shigella flexneri 5a?.

• Processo: 04/12159-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de março de 2005
• Data de Término da vigência: 29 de fevereiro de 2008
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Microbiologia - Biologia e Fisiologia dos Microorganismos
• Pesquisador responsável: Michel Pinkus Rabinovitch
• Beneficiário: Kendi Okuda
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Shigella flexneri Síntese proteica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Celulas Enucleadas | Ciclohemida | Citoplastos | Infeccao Intracelular | Shigella Flexneri | Sintese Proteica

Resumo

Citoplastos (células enucleadas) de fibroblastos L929 de camundongo podem ser infectados peio enteropatógeno humano Shigella flexneri 5a de forma semelhante às células nucleadas, ainda que a porcentagem de infecção diminua com a enucleação (Yamamoto, Coimbra, Silva e Rabinovitch, manuscrito anexo). Este resultado indica que a infecção dos fibroblastos, que neste modelo se completa em cerca de 5 h, pode ocorrer na ausência de nova transcrição gênica ou de sinalização dependente do núcleo. Este projeto pergunta se a infecção por Shigella de fibroblastos de linhagem L929 ou primários de camundongo, nucleados ou enucleados, necessita de (nova) síntese protéica pelas células hospedeiras. Para responder a esta pergunta as células nucleadas ou enucleadas serão tratadas por tempos diferentes com uma gama de concentrações de cicloheximida (CHX) e em seguida infectadas. A escolha de pré-tratamentos prolongados pela CHX visa determinar se proteínas de vida curta são importantes para a infecção. Para cada tempo e concentração de tratamento pela CHX, e para cada tempo de infecção, serão avaliadas: a viabilidade das células, a porcentagem de infecção, a carga bacteriana, a incorporação de 35S metionina, e o padrão dos "spots" de proteína em radioautogramas de eletroforese bidimensional. (AU)