Isolamento, clonagem do cDNA correspondente e expressão de beta glucanases digestivas de insetos

• Processo: 05/58658-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2006
• Data de Término da vigência: 30 de junho de 2006
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Clelia Ferreira Terra
• Beneficiário: Ivan Bragatto
• Instituição Sede: Instituto de Química (IQ). Universidade de São Paulo (USP). São Paulo , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 02/11938-5 - A digestão nos insetos: uma abordagem molecular, celular, fisiológica e evolutiva, AP.TEM
• Assunto(s): Digestão animal Insetos beta-Glucanas DNA complementar
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Beta-Glucanases | Digestao Em Insetos

Resumo

As beta-glucanases de animais em geral e de insetos em particular são muito pouco conhecidas. Uma vez que vertebrados não possuem essas enzimas, um conhecimento de suas características é interessante porque elas podem ser usadas como alvo para estratégias de controle de insetos. Até o presente, nenhuma beta 1,3 glucanase de insetos foi sequenciada e não se sabe a qual família das glicosídeo hidrolases elas pertencem. O objetivo desse trabalho é clonar o cDNA correspondente a beta-glucanases presentes nos tubos digestivos de insetos e expressar essas enzimas. Como não conseguimos amplificar o cDNA correspondente a essas enzimas usando iniciadores degenerados, outra abordagem será feita. Enzimas serão adsorvidas em pachyman (beta-1,3 glucana linear de Porius cocos), recuperadas e separadas por eletroforese em gel de poliacrilamida. Os polipeptídeos serão removidos do gel e mandados para sequenciamento amino terminal. As seqüências serão usadas para gerar iniciadores. Após a clonagem do cDNA total, tentativas serão feitas de expressar a enzima em bactérias e se não formos bem sucedidos tentaremos a expressão em Pickia pastoris. (AU)