Caracterizacao de glicosaminoglicanos em mitocondrias e sua interacao com "citocromo c".

• Processo: 00/09335-5
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de outubro de 2000
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 2001
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Metabolismo e Bioenergética
• Pesquisador responsável: Iseli Lourenço Nantes Cardoso
• Beneficiário: Fernando Conrado Abrao
• Instituição Sede: Diretoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Extensão. Universidade de Mogi das Cruzes (UMC). Mogi das Cruzes , SP, Brasil
• Vinculado ao auxílio: 98/13659-9 - Atividade peroxidática de citocromos sobre hidroperóxidos, compostos carbonílicos, bases de Schiff e lipídios de membrana: produção de espécies excitadas e radicais livres, AP.JP
• Assunto(s): Mitocôndrias Citocromos c Estresse oxidativo Apoptose
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Apoptose | Citocromo C | Estresse Oxidativo | Glicosaminoglicanos Sulfatados | Mitocondrias

Resumo

Este projeto objetiva demonstrar a presença glicosaminoglicanos sulfatados (GAGS) na membrana mitocondrial externa. A presença de GAGS em mitocôndrias será determinada através da marcação metabólica dos proteoglicanos e glicoproteínas sulfatadas com [35S]-sulfato. Posteriormente, será feita uma comparação com mitocôndrias da linhagem de células CHO selvagens (linhagem K1) e mutantes defectivas de GAGS (linhagem 756). Paralelamente serão feitos estudos de alterações estruturais em citocromo c induzidas por GAGS na presença e na ausência de sistemas modelo de membrana (lipossomos). Serão utilizados diferentes tipos de GAGS tais como heparina, dermatam sulfato, condroitim sulfato, heparam sulfato e ácido hialurônico. As alterações estruturais serão monitoradas através de espectroscopia UV-visível, fluorescência e dicroísmo circular (CD). Estas técnicas permitirão determinar alterações na estrutura secundária e terciária da fração proteica de citocromo c, bem como em seu grupo prostético, o heme. Será também investigado o papel de GAGS como trapeadores de radicais livres e espécies excitadas geradas pela atividade peroxidase de citocromos. Para tanto, analisaremos o comportamento de uma reação modelo de citocromo c com aldeídos (citocromo c x difenilacetaldeído) na presença de GAGS. Serão monitorados, a cinética de redução de citocromo c. o consumo de oxigênio e a quimiluminescência na Dresenca de GAGS. (AU)