Efeito do hormonio de crescimento sobre a osteogenese em cultura de osteoblastos humanos diferenciados a partir de celulas-tronco mesenquimais.

• Processo: 07/00728-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de abril de 2007
• Data de Término da vigência: 31 de março de 2008
• Área de conhecimento: Ciências da Saúde - Odontologia - Cirurgia Buco-maxilo-facial
• Pesquisador responsável: Grasiele Edilaine Crippa
• Beneficiário: Glauber Macedo Rama
• Instituição Sede: Faculdade de Odontologia de Ribeirão Preto (FORP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Fosfatase alcalina Hormônio do crescimento Mineralização Osso alveolar Cultura de células Osteoblastos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Fosfatase Alcalina | Hormonio De Crescimento | Mineralizacao | Osso Alveolar | Osteoblastos | Cultura de células

Resumo

O hormônio de crescimento (GH) exerce importante função na formação e remodelação óssea. Sendo assim, o presente projeto tem como objetivo investigar os efeitos de diferentes concentrações de GH na cultura de osteoblastos humanos diferenciados a partir de células-tronco. Essas células serão obtidas de descartes de doadores saudáveis de medula e cedidas pelo Serviço de Transplante de Medula Óssea do HCFMRP/USP. As células serão cultivadas em garrafas T75 na presença de meio essencial mínimo suplementado com soro fetal bovino e substâncias que favorecem a diferenciação em osteoblastos: dexametasona, ácido ascórbico e B-glicerol fosfato (MTS 10%). Após confluência na superfície da garrafa, um número estimado de células (2 x 104/poço) será transportado para as placas de cultura, com 24 poços, e submetidas à contínua exposição ao GH, nas concentrações de 10, 100, 200 e 300 ng/ml, n=5 poços. Após 24 horas será avaliada a adesão celular enquanto que a viabilidade e proliferação serão avaliadas após 10 dias. Aos 7, 14 e 21 dias serão avaliados o conteúdo de proteína total, colágeno e medida da atividade da fosfatase alcalina (ALP), e também aos 21 dias, a formação de matriz mineralizada. O conteúdo de osteocalcina será investigado por ELISA utilizando o sobrenadante das células 96 horas após o plaqueamento. Estudaremos a expressão dos genes ALP, Colágeno 1, RUN X, osteocalcina e Osteopontina. pela técnica do PCR em tempo real (RT-PCR). Para tanto, o RNA será extraído das células após 7 dias de cultura.