Estudos de desagregação e renaturação de proteínas com interesse terapêutico utilizando altas pressões hidrostáticas

• Processo: 09/51498-3
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 2010
• Data de Término da vigência: 31 de julho de 2014
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Ligia Ely Morganti Ferreira Dias
• Beneficiário: Rosa Maria Chura Chambi
• Instituição Sede: Instituto de Pesquisas Energéticas e Nucleares (IPEN). Secretaria de Desenvolvimento Econômico (São Paulo - Estado). São Paulo , SP, Brasil
• Bolsa(s) vinculada(s): 12/20381-6 - Estudos em RMN de alta pressão para caracterização de estados intermediários de conformação envolvidos no enovelamento de proteínas, BE.EP.PD
• Assunto(s): Pressão hidrostática Corpos de inclusão Escherichia coli Proteínas recombinantes
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Alta Pressao | Corpos De Inclusao | Escherichia Coli | Proteinas Recombinantes | Renaturacao

Resumo

Proteínas recombinantes possuem um enorme potencial para o tratamento de doenças e vêm ganhando mais espaço na economia. Atualmente já movimentam um mercado de bilhões de dólares em todo o mundo, tornando-se um importante foco para companhias farmacêuticas e de biotecnologia. As bactérias Escherichia coli são as hospedeiras mais utilizadas para produzir essas proteínas. No entanto, a agregação destas proteínas é um problema comum na sua produção. Assim, existe um grande interesse na busca de novas técnicas, mais baratas e menos laboriosas, para dissolver os grandes agregados protéicos ou corpos de inclusão. O desafio é tirar vantagem dos altos níveis de expressão em corpos de inclusão, convertendo proteínas inativas e agregadas em produtos solúveis e bioativos. Estudos recentes têm demonstrado que pressões hidrostáticas moderadas são uma alternativa atrativa às técnicas tradicionais de desagregação e renaturação de proteínas. A aplicação de alta pressão modula as interações proteína-proteína e proteína-solvente por meio de alterações nos volumes, conseqüentemente afetando o equilíbrio de espécies conformacionais de proteínas entre o estado nativo e desnaturado, bem como formas monoméricas, oligoméricas e agregados. Alta pressão hidrostática (APH) induz a desagregação de proteínas agregadas e subseqüente a renaturação em um único passo, sem a necessidade da utilização de altas concentrações de agentes caotrópicos, melhorando o rendimento de renaturação com redução de custos, oferecendo vantagens significativas sobre os métodos tradicionais, facilitando a preparação de proteínas para estudos estruturais e funcionais, assim como aplicações na indústria biotecnológica. A proposta deste estudo é demonstrar a eficiência do APH na recuperação de proteínas solúveis e biologicamente ativas a partir de corpos de inclusão. Este método será aplicado a diferentes proteínas que apresentam diferentes funções com relevância terapêutica ou profilática. (AU)