Avaliacao dos possiveis efeitos genotoxicos de leishmania amazonensis por meio do teste de mutacao e recombinacao somatica (smart)

• Processo: 08/57572-8
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Iniciação Científica
• Data de Início da vigência: 01 de janeiro de 2009
• Data de Término da vigência: 31 de dezembro de 2009
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Mutagênese
• Pesquisador responsável: Luciana Pereira Silva
• Beneficiário: Guilherme Ferreira Caetano
• Instituição Sede: Faculdade de Ciências e Letras (FCL-ASSIS). Universidade Estadual Paulista (UNESP). Campus de Assis. Assis , SP, Brasil
• Assunto(s): Genotoxicidade Leishmania mexicana
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Genotoxicidade | Leishmania Amazonensis | Recombinacao Somatica | Smart

Resumo

As infecções parasitárias humanas podem influenciar no processo de carcinogênese devido a instabilidades genéticas e interferências inter-celular e intra-celular por meio de citocinas indutoras da resposta proliferativa celular no reparo dos danos teciduais durante a inflamação. A infecção com Leishmania spp pode induzir danos cromossômicos e no DNA, devido ao mecanismo de evasão do hospedeiro, estimulação do sistema imune e por ser uma doença crônica e inflamatória. O objetivo deste trabalho é verificar o potencial genotóxico do antígeno total de Leishmania amazonensis avaliado pelo teste de Mutação e Recombinação Somática (SMART). As formas promastigotas na fase estacionária de L. amazonensis serão utilizadas no preparo do antígeno total em solução tamponada com fosfato (PBS). Os parasitos serão lisados por seis ciclos sucessivos de congelamento em nitrogênio líquido (-196ºC) e descongelamento em banho-maria à 37ºC e submetidos a três pulsos de sonicação de 30 segundos a 80 Htz. O lisado será centrifugado a 20.000 x g por 1 hora a 4ºC e o sobrenadante coletado, aliquotado e congelado a -20ºC até o momento do uso. A concentração protéica será determinada pelo método de Lowry. No delineamento experimental será utilizado teste em Drosophila melanogaster. No teste SMART as larvas de terceiro estádio de D. melanogaster, provenientes dos cruzamentos padrão (ST) e de alta bioativação (HB), serão tratadas por 48 horas nas concentrações de 12,5; 25,0 e 50,0 micrograma s/m L de L, amazonensis. Serão incluídos controles negativo (PBS) e positivo (uretano). Os resultados do teste SMART serão analisados com o nível de significância de p=0,05. Pretende-se verificar se o potencial genotóxico do antígeno de L. amazonensis na indução de danos cromossômicos e no DNA relacionados aos processos de mutagênese e carcinogênese. (AU)