Aspectos moleculares das duplicações do DNA mitocondrial

• Processo: 97/05131-1
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de agosto de 1997
• Data de Término da vigência: 30 de setembro de 1997
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Genética - Genética Humana e Médica
• Pesquisador responsável: Célia Harumi Tengan
• Beneficiário: Célia Harumi Tengan
• Instituição Sede: Escola Paulista de Medicina (EPM). Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP). Campus São Paulo. São Paulo , SP, Brasil
• Assunto(s): Doenças mitocondriais DNA mitocondrial Mitocôndrias Deleção de genes Duplicação cromossômica
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Delecao | Dna Mitocondrial | Duplicacao | Miopatia | Mitocondria

Resumo

As deleções do DNA mitocondrial (DNAmt) são as mutações mais freqüentes nos pacientes com doenças mitocondriais. A origem deste tipo de rearranjo ainda não está bem esclarecida, acredita-se que a presença de repetições diretas seja um fator predisponente à ocorrência de recombinações, levando à formação de deleções. A partir do achado de duplicações do DNAmt as hipóteses para explicar a origem dos rearranjos tornaram-se mais complexas. Adicionando-se o fato dos dois rearranjos estarem presentes em um mesmo paciente, surgiu a hipótese de que as moléculas de DNAmt deletado seriam derivadas de moléculas de DNAmt duplicadas. Além das duplicações de grandes segmentos do DNAmt, também foram encontradas duplicações de segmentos menores (260pb), denominadas de mini-duplicações. Foi sugerido que estas mini-duplicações, por estarem localizadas em uma região controladora da replicação do DNAmt, poderiam ser um fator predisponente para a geração de deleções do DNAmt. O objetivo deste estudo é a melhor caracterização das duplicações do DNAmt, através do estudo dos tipos de rearranjos do DNAmt presentes em pacientes com uma doença mitocondrial e correlação genotípica/fenotípica. Realizaremos a análise do DNA total, obtido de biópsia de músculo esquelético, através de Southern blot para a detecção dos grandes rearranjos. Os limites dos rearranjos encontrados serão obtidos através de mapeamento e seqüenciamento direto. A pesquisa da mini-duplicação de 260pb será realizada através da detecção por PCR (polymerase chain reaction). Os resultados serão analisados quanto a: freqüência do conjunto deleção/duplicação nos pacientes com miopatia mitocondrial, correlação clínica entre pacientes com deleção simples e deleção/duplicação (idade de início da sintomatologia e idade atual, presença de endocrinopatia, hereditariedade, proporção das mutações), análise da seqüência nucleotídeo da região dos pontos de quebra dos rearranjos (presença de repetições diretas, localização preferencial, tamanho da deleção) e presença da mini-duplicação (correlação entre a presença da mini-duplicação e presença da deleção simples). (AU)