Caracterização funcional das regiões promotoras dos genes BhC4-1 e BhB10-1 de Bradysia hygida em Drosophila transgênicas

• Processo: 96/06418-0
• Modalidade de apoio: Bolsas no Brasil - Pós-Doutorado
• Data de Início da vigência: 01 de dezembro de 1996
• Data de Término da vigência: 30 de novembro de 1999
• Área de conhecimento: Ciências Biológicas - Bioquímica - Biologia Molecular
• Pesquisador responsável: Nadia Monesi
• Beneficiário: Nadia Monesi
• Instituição Sede: Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto (FMRP). Universidade de São Paulo (USP). Ribeirão Preto , SP, Brasil
• Assunto(s): Drosophila Regiões promotoras genéticas Ecdisona Mosquitos geneticamente modificados Puffs cromossômicos
• Palavra(s)-Chave do Pesquisador: Drosophila Transgenicas | Ecdisona | Ensaios Funcionais | Pufes De Dna | Regioes Promotoras

Resumo

Os pufes de DNA, que se formam nos cromossomos politênicos da glândula salivar de Sciaridae, são sítios onde ocorrem simultaneamente a amplificação e a transcrição gênica. Ambos processos ocorrem de modo regulado no desenvolvimento, ao final do estágio larval, e em um tecido específico, a glândula salivar, e estão sob o controle do hormônio ecdisona. Deste modo, os pufes de DNA se apresentam como um sistema interessante para o entendimento da regulação da amplificação e transcrição bem como as interações que possam ocorrer entre estes processos. Uma das limitações deste modelo biológico é a inexistência de um sistema que permita a transformação deste organismo. Entretanto, linhagens de Drosophila, transformadas com fragmentos das regiões promotoras dos genes dos pufes de DNA II/9-1, de Sciara coprophila, e BhC4-1, de Bradysia hygida, têm demonstrado que os fatores necessários para a regulação temporal e tecidual são conservados em Drosophila (Bienz-Tadmor et al, 1991; Monesi et al., 1996), abrindo a possibilidade de realização de ensaios funcionais de elementos controladores da transcrição de genes amplificados em pufes de DNA. O presente projeto tem por objetivo a identificação de elementos controladores da transcrição nas regiões promotoras dos genes BhC4-1 e BhB10-1 de B. hygida através da realização de ensaios funcionais em Drosophila transgênicas. Além disso, visa iniciar uma análise da ação do hormônio ecdisona na ativação do promotor do gene BhC4-1, através da realização de ensaios "in vitro", em linhagens transgênicas já estabelecidas. Outro ponto importante é que a realização deste projeto acarretará no estabelecimento, junto ao Departamento de Morfologia da FMRP-USP, da metodologia de transformação de Drosophila mediada pelo elemento P. Durante meu doutorado, estagiei durante um ano e meio dentro do programa de bolsa de doutorado tipo sanduíche do CNPq, no laboratório do Prof. Dr. Marcelo Jacobs-Lorena, na Case Western Reserve University (Cleveland-OH), onde fui treinada nesta metodologia. O estabelecimento; desta metodologia será também importante no estudo dos mecanismos de amplificação. É tentador pensar na utilização destes ensaios funcionais heterólogos com vistas à caracterização de elementos envolvidos no controle da amplificação que ocorre em pufes de DNA. Apesar de não ter sido verificada a amplificação nos dois casos tentados até o momento (Bienz-Tadmor et al., 1991; Monesi et al., 1996), o fato dos constructos testados não conterem regiões de origem de replicação não permite descartar a hipótese de que fatores envolvidos no controle da amplificação em pufes de DNA sejam conservados em Drosophila. Esta hipótese é razoável se pensarmos no fato de que, em Drosophila, embora sem a formação de pufes de DNA, um fenômeno similar de amplificação ocorre nas células foliculares ovarianas, no final da ovogênese. (AU)

Publicações científicas

(Referências obtidas automaticamente do Web of Science e do SciELO, por meio da informação sobre o financiamento pela FAPESP e o número do processo correspondente, incluída na publicação pelos autores)

N. MONESI; J.F. SOUSA; M.L. PAÇÓ-LARSON. The DNA puff BhB10-1 gene is differentially expressed in various tissues of Bradysia hygida late larvae and constitutively transcribed in transgenic Drosophila. Brazilian Journal of Medical and Biological Research, v. 34, n. 7, p. 851-859, 2001-07-00. (96/06418-0)